发明名称 |
一种基于基因敲除小鼠的脂肪肝相关肝癌模型构建方法 |
摘要 |
本发明涉及一种基于基因敲除小鼠的脂肪肝相关肝癌模型构建方法,其特征在于:选用APOE-/-和LDLR-/-基因敲除小鼠包括雌鼠和雄鼠,所述雌鼠和雄鼠配额,获得双基因敲除小鼠,设计引物,使用聚合酶链式反应即PCR反应体系鉴定小鼠基因型,所述PCR反应体系包括ApoE基因鉴定PCR反应条件和LDLR基因鉴定PCR反应条件,双基因敲除小鼠受孕,获得乳鼠,注射链脲佐菌素,在乳鼠离乳后开始高脂饮食,最后出现肝癌,经鉴定在离乳后高脂饮食两种即6周开始出现脂肪肝,8-10周出现NASH、13-16周出现异型增生结节、18-24周出现肝癌。24周肝癌发生率约为100%。比单纯基因APOE-/-和LDLR-/-基因敲除小鼠高脂饮食发生NASH和HCC的时间提前24-30周,发生率高。 |
申请公布号 |
CN105052830A |
申请公布日期 |
2015.11.18 |
申请号 |
CN201510496249.0 |
申请日期 |
2015.08.04 |
申请人 |
施军平 |
发明人 |
施军平;罗燕 |
分类号 |
A01K67/02(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
A01K67/02(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种基于基因敲除小鼠的脂肪肝相关肝癌模型构建方法,其特征在于:选用APOE‑/‑和LDLR‑/‑基因敲除小鼠包括雌鼠和雄鼠,所述雌鼠和雄鼠配额,获得双基因敲除小鼠,剪去1mm小鼠尾巴,加入250μl裂解液进行消化,抽提小鼠基因组DNA,设计引物,使用聚合酶链式反应即PCR反应体系鉴定小鼠基因型,所述PCR反应体系包括ApoE基因鉴定PCR反应条件和LDLR基因鉴定PCR反应条件,对应的引物分别为ApoE共同正向引物和LDLR共同正向引物,双基因敲除小鼠受孕,获得乳鼠,在乳鼠出生后48h‑72h内,注射链脲佐菌素,在乳鼠离乳后开始高脂饮食,乳鼠6周开始出现脂肪肝,8‑10周出现NASH、13‑16周出现异型增生结节、18‑24周出现肝癌。 |
地址 |
310000 浙江省杭州市下城区三塘竹园17幢3单元301室 |