一种基于基因敲除小鼠的脂肪肝相关肝癌模型构建方法

摘要

本发明涉及一种基于基因敲除小鼠的脂肪肝相关肝癌模型构建方法，其特征在于：选用APOE-/-和LDLR-/-基因敲除小鼠包括雌鼠和雄鼠，所述雌鼠和雄鼠配额，获得双基因敲除小鼠，设计引物，使用聚合酶链式反应即PCR反应体系鉴定小鼠基因型，所述PCR反应体系包括ApoE基因鉴定PCR反应条件和LDLR基因鉴定PCR反应条件，双基因敲除小鼠受孕，获得乳鼠，注射链脲佐菌素，在乳鼠离乳后开始高脂饮食，最后出现肝癌，经鉴定在离乳后高脂饮食两种即6周开始出现脂肪肝，8-10周出现NASH、13-16周出现异型增生结节、18-24周出现肝癌。24周肝癌发生率约为100％。比单纯基因APOE-/-和LDLR-/-基因敲除小鼠高脂饮食发生NASH和HCC的时间提前24-30周，发生率高。

主权项

一种基于基因敲除小鼠的脂肪肝相关肝癌模型构建方法，其特征在于：选用APOE‑/‑和LDLR‑/‑基因敲除小鼠包括雌鼠和雄鼠，所述雌鼠和雄鼠配额，获得双基因敲除小鼠，剪去1mm小鼠尾巴，加入250μl裂解液进行消化，抽提小鼠基因组DNA，设计引物，使用聚合酶链式反应即PCR反应体系鉴定小鼠基因型，所述PCR反应体系包括ApoE基因鉴定PCR反应条件和LDLR基因鉴定PCR反应条件，对应的引物分别为ApoE共同正向引物和LDLR共同正向引物，双基因敲除小鼠受孕，获得乳鼠，在乳鼠出生后48h‑72h内，注射链脲佐菌素，在乳鼠离乳后开始高脂饮食，乳鼠6周开始出现脂肪肝，8‑10周出现NASH、13‑16周出现异型增生结节、18‑24周出现肝癌。