功能性食品中氯霉素残留的HPLC-MS-MS检测方法

摘要

本发明公开了一种功能食品中氯霉素残留的HPLC-MS-MS检测方法，包括如下步骤：称取试样，加入氘代氯霉素作内标溶液，加入乙酸乙酯、氢氧化铵、无水硫酸钠，匀质提取，离心，上清液转移至鸡心瓶中；将鸡心瓶中上清液浓缩至干；用水溶解，超声，加入正己烷涡旋混合，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加正己烷涡旋混合，静置分层，移取水相于离心管中，离心，过滤膜后，供高效液相色谱-串联质谱测定；另精确称取氯霉素标准品用色谱甲醇超声溶解定容，配成不同浓度的溶液；经高效液相色谱-串联质谱测定；得到标准曲线；将获得的检验数据通过标准曲线计算待测样品中氯霉素浓度；本发明的方法准确度好、精度高、线性良好。

主权项

一种功能性食品中氯霉素残留的HPLC‑MS‑MS检测方法，其特征是包括如下步骤：(1)称取1g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管中，加入15μL浓度为0.4μg/mL的氘代氯霉素内标溶液，加入15mL乙酸乙酯、0.45mL氢氧化铵，5g无水硫酸钠，匀质提取30s，以4000r/min离心5min，上清液转移至100mL鸡心瓶中；(2)取第二个50mL离心管，加入15mL乙酸乙酯和0.45mL氢氧化铵作为洗涤液，洗涤步骤(1)匀质操作时用的刀头10s，洗涤液移入所述100mL鸡心瓶中，再向第二个50mL离心管中加入15mL乙酸乙酯和0.45mL氢氧化铵，用玻璃棒搅拌第二支离心管中的残渣后，于漩涡振荡器上涡旋提取1min，超声波提取5min，以4000r/min离心5min，上清液合并至所述100mL鸡心瓶中；(3)向第二支离心管的残渣中再加入15mL乙酸乙酯，于漩涡振荡器上涡旋提取1min，超声波提取5min，以4000r/min离心5min，将上清液置于所述100mL鸡心瓶中，在45℃旋转浓缩至干；(4)将所述鸡心瓶中的残渣用1mL水溶解，超声5min，加入3mL正己烷涡旋混合30s，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加3mL正己烷涡旋混合30s，静置分层，移取水相于1.5mL的离心管中，以10000r/min离心5min，过0.2μm滤膜后，供高效液相色谱‑串联质谱测定；(5)精确称取氯霉素标准品10mg于100mL容量瓶中，用色谱甲醇超声溶解定容至刻度，为标准储备液；将所述标准储备液用色谱甲醇分别稀释，配成0.1μg/mL，0.2μg/mL,0.4μg/mL，0.8μg/mL和1μg/mL的溶液；分别注入高效液相色谱‑串联质谱测定；得到标准曲线；(6)将步骤(4)获得的检验数据通过标准曲线计算待测样品中氯霉素浓度；HPLC测定条件：a)色谱柱：XTerra MS C18，150mm×2.1mm，3.5μm；b)流动相及梯度洗脱条件：0‑6分钟流动相乙腈从20％到90％，流动相水从80％到10％；6‑8分钟流动相乙腈从90％到20％，流动相水由10％到80％；8‑15分钟流动相乙腈保持20％不变，流动相水保持80％不变；c)进样量：5μL；d)柱温：35℃；e)流速：0.2mL/min；MS/MS参考条件a)电离方式：电喷雾电离，负离子(ESI–)；b)毛细管电压：3.00kV；c)离子源温度：110℃；d)锥孔气：氮气，50L/Hr；e)脱溶剂气：氮气，700L/Hr，温度400℃；f)碰撞气：氩气；g)扫描模式：多反应监测(MRM)模式。