一种海南石斛组织培养繁育方法

摘要

一种海南石斛组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取海南石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明所述的培养方法得到的海南石斛丛生芽增殖系数达到15-20倍，能够在短时间内提供成活率高的海南石斛优质种苗，有效解决海南石斛的规模化育苗问题。

主权项

一种海南石斛组织培养繁育方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取海南石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2‑0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养90天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.0‑4.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、2.0‑4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1‑1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。