藓竺竹高效再生体系的建立方法

摘要

本发明公开了一种藓竺竹芽高效再生体系的建立方法，按下列步骤进行：1）芽愈伤组织的诱导培养；2）愈伤组织的增殖培养；3）愈伤组织的分化培养；4）试管苗的生根培养；5）再生植株的炼苗和移栽。本发明涉及一种以草本竹的芽为外植体的植物组培方法，是对以草本竹芽为外植体经愈伤组织诱导建立再生体系的有益尝试，采用本方法能够使外植体高效诱导出愈伤组织，建立高效的再生体系，扩大了竹子研究领域，也为该竹子遗传转化研究奠定了良好的基础，本方法简单易行、利于推广，实施条件宽松，效果显著。

主权项

藓竺竹高效再生体系的建立方法，其特征在于按下列步骤进行：1）愈伤组织诱导培养从温室中选生长健壮无病斑的藓竺竹植株中取芽为外植体，切下带芽的茎段1.5‑2.5cm，自来水冲洗1‑2h后，75%酒精浸泡30s，再用质量比浓度为1%的次氯酸钠溶液真空抽滤消毒15min，在超净工作台中用无菌水冲洗5‑6次，最后在体式显微镜下剥掉叶鞘，切取带芽茎段0.4‑0.6cm，每管一个芽接种于诱导培养基中：诱导基本培养基为MS，添加的外源激素为2,4‑D即2,4‑二氯苯氧乙酸和NAA即萘乙酸，pH为5.7；培养条件为：暗培养，25±2℃，诱导培养50±2d，愈伤组织形成；2）愈伤组织增殖培养取诱导的淡黄色致密愈伤组织接种于增殖培养中进行培养，增殖培养基本培养基为MS，添加浓度为0.1‑1mg·L^‑1的2,4‑D，pH为5.7；培养条件为：暗培养，25±2℃，培养30±2d；3）愈伤组织分化培养将经过增殖培养的致密愈伤组织在分化培养中进行分化，分化基本培养基为MS，添加KT即激动素和NAA；pH为5.7；培养条件为：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；4）分化苗生根培养将愈伤组织分化培养出的丛生芽切割分离为单芽，选取长至1‑2cm高的健壮芽接种于生根培养基中进行生根诱导，生根基本培养基为1/2 MS，添加浓度为0‑0.5mg·L^‑1的IBA即吲哚丁酸；pH为5.7；培养条件为：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；5）再生植株的移栽当试管苗高8‑10cm，根长4‑5cm且植株健壮时，将试管苗置于强度为20000lux的强光下炼苗一周，之后从试管中取出苗，用30‑40℃的温水将根部的培养基清洗干净，移栽于混合培养基质中，将基质压实并进行单株套袋，一周后剪去塑料套袋两角，两周后脱去套袋，待长出新叶时移栽至温室，得到健壮的再生植株，四周左右后统计植株移栽成活率及生长状况。