一种构建野生番茄里基茄再生体系及遗传转化体系的方法

摘要

本发明涉及遗传转化领域，具体地，涉及一种构建野生番茄里基茄再生体系及遗传转化体系的方法。所述包括步骤：（1）里基茄无菌苗的培养；（2）在愈伤诱导培养基CIM中诱导里基茄的根、茎和叶三种不同外植体产生愈伤组织与丛生芽点；（3）将诱导出的丛生芽进行单株分离，转入无菌苗培养基中诱导生根成苗。本发明选取野生番茄材料里基茄为再生和遗传转化研究的对象，而不是基因型专性很强的现代栽培番茄，更利于开展番茄基因工程方面的研究和番茄分子育种的进程；建立的里基茄的相应体系，适于三种外植体，并且转化介质和培养条件完全一致，大大节约了相关研究的费用支出；更重要的是，再生和转化效率高、体系稳定、试验时长短。

主权项

一种构建野生番茄里基茄再生体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)里基茄无菌苗的培养，选择健康饱满的里基茄种子，用75％v/v的乙醇和2.5％的次氯酸钠消毒，4℃低温催芽，25℃黑暗孵育，然后于25℃，16h光照/8h黑暗，光照度为120μmol.m^‑2s^‑1的组培条件下进行培养；(2)在愈伤诱导培养基CIM中诱导里基茄的根、茎和叶三种不同外植体产生愈伤组织与丛生芽点，选取根、茎和叶三种外植体，置于愈伤诱导培养基CIM上，然后于25℃，16h光照/8h黑暗，光照度为120μmol.m^‑2s^‑1的组培条件下进行培养，其中愈伤诱导培养基CIM的配方为：MS盐+B5有机+20mg/L甘露醇+0.2mg/L玉米素+1.2mg/L生长素+30g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，pH5.8，每月更换一次培养基；(3)选择长度为1‑2cm的丛生芽进行单株分离，转入无菌苗培养基SSCM2中诱导生根成苗，然后于25℃、16h光照/8h黑暗，光照度为120μmol.m^‑2s^‑1的组培条件下进行培养，每月更换一次培养基，其中，无菌苗培养基SSCM2中的组分为：MS盐+B5有机+0.15mg/Lα‑萘乙酸+20mg/L甘露醇+30g/L蔗糖+7.8g/L琼脂粉，pH5.8。