一种脂肪来源干细胞立体球型培养方法

摘要

本发明公开了一种脂肪来源干细胞立体球型培养方法，它涉及细胞培养技术领域。培养方法为:低吸附性培养容器的制作；脂肪来源干细胞提取；采用平面贴壁培养法将脂肪来源干细胞培养至第三代后，以2.5*10⁴/cm²的密度接种在壳聚糖低吸附性培养容器里；选择高糖培养基，每2-3天换液培养；5-8天后可以观察到，在壳聚糖膜表面有立体球型细胞结构形成；将细胞转移到新的贴壁培养瓶中继续培养5-8天；收获细胞和细胞培养液。它的制备方法比较简便，最大限度还原脂肪来源干细胞在人体内的生存状态，释放出更多的生长因子，使细胞聚集成球形生长，还原细胞真实的生理状态，提高细胞功能的表达与发挥，增加细胞因子的产出率。

主权项

一种脂肪来源干细胞立体球型培养方法，其特征在于：它的具体培养方法为：(1)、低吸附性培养容器的制作：利用壳聚糖的低吸附原理，将壳聚糖溶液均匀的涂在培养容器底部，烘干后将培养容器灭菌待用；(2)、脂肪来源干细胞提取：将抽脂得到的脂肪组织用磷酸盐缓冲液洗涤6‑7次至洗涤液变澄清，在洗涤干净的脂肪组织中加入同等体积的已预热的0.1%的Ⅰ型胶原酶，在35 ℃‑40 ℃下消化30 min ‑45 min，并经常摇动，待脂肪组织块呈黏稠且细小的颗粒状后，离心，去除上层杂液，留5 mL的悬液于底部，加入适量磷酸盐缓冲液稀释胶原酶，吹打悬液后用80‑100目筛网过滤，所得滤液离心，收集细胞，最后用培养液重悬，接种于贴壁培养瓶中，在35℃‑38 ℃下，体积分数为5%的CO²条件下进行平面贴壁培养；(3)、在平面贴壁培养法将脂肪来源干细胞培养至第三代后，以2.5*10⁴/cm²的密度接种在壳聚糖低吸附性培养容器里；(4)、选择适用于快速生长、低吸附细胞的高糖培养基，其中高糖培养基中含葡萄糖4500mg/L，每2‑3天换液培养；(5)、5‑8天后可以观察到，在壳聚糖膜表面有立体球型细胞结构形成；(6)、将细胞转移到新的贴壁培养瓶中继续培养5‑8天；(7)、收获细胞和细胞培养液。