针对大肠杆菌O157的RNA恒温扩增核酸检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种针对大肠杆菌O157的RNA恒温扩增核酸检测试剂盒。包括：捕获探针、O157检测引物T7引物和nT7引物、O157检测探针、M-MLV反转录酶和T7RNA聚合酶等试剂。本发明试剂盒能够检测食品中的O157RNA，具有特异性高、灵敏度高（可达10³CFU/mL）、污染低（扩增产物RNA在自然环境下易于降解）及准确（避免假阳性）、快速（常规40分钟完成检测）检测的特点，将在大肠杆菌O157快速检测中发挥重要作用，应用前景广阔。

主权项

一种针对大肠杆菌O157的RNA恒温扩增核酸检测试剂盒，包含有一条序列表中序列1所示的大肠杆菌O157的靶标核酸的捕获探针，一对用于在M‑MLV反转录酶作用下产生O157靶标核酸的DNA拷贝的O157检测引物T7和nT7，和一条用于与在T7 RNA聚合酶作用下根据所述O157靶标核酸的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的O157检测探针；所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述O157检测引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；所述O157检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团；所述试剂盒还包含有O157内标和内标检测探针；所述O157内标为O157核苷酸序列的竞争性内标，可与捕获探针特异性结合，并使用T7引物和nT7引物，由序列表中序列7所示的O157 IC RNA；所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，且所述内标检测探针存在于O157检测液中。