简易、快速分离筛选好氧解油脂芽孢杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种分离解油脂芽孢杆菌的方法，对目标物取样进行间歇增氧选择性富集培养，然后对富集培养物进行水浴后，稀释涂布在含溴百里酚蓝（BTB）指示剂的油脂平板，利用解油菌能将动、植物油脂分解成脂肪酸而显黄绿色的特点，快速筛出好氧产脂肪解脂的菌株；通过划线法得到纯培养菌株，接着对纯培养物进行革兰氏、芽孢染色镜检，以初筛选出具有好氧分解油脂能力的芽孢杆菌；取纯培养菌液滴加到在不同油脂浓度的油脂平板中灭菌滤纸片上，以无菌水滤纸片为对照进行培养，根据透明圈大小快速复筛出高效解油脂的菌株。本发明方法具有快速分离、提纯出高效好氧解油脂的芽孢杆菌的特点。

主权项

简易、快速分离筛选好氧解油脂芽孢杆菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）选择土壤、餐饮业下水道管壁泥样或活性污泥目标物接种于含有油脂的富集培养基中，5‑37℃进行间歇增氧富集培养；（2）移取富集培养物在75‑80℃水浴杀除杂菌后，稀释涂布于含有BTB指示剂的油脂梯度平板上5‑37℃培养2‑7d；其中，含有BTB指示剂的油脂梯度平板的制备方法是先在培养皿中倒空白LB琼脂倾斜平板，待其凝固后倒入经充分混匀油脂的BTB琼脂培养基；（3）对培养后的平板挑选高梯度区域呈黄色菌落，继续用划线法获得纯培养物，对纯培养物革兰氏染色镜检，以内生芽孢杆菌作为初筛菌株；（4）对初筛菌株利用LB液体培养基纯培养；（5）取纯培养菌液滴加到处于不同油脂浓度的油脂平板中的灭菌滤纸片上，以无菌水滤纸片为对照，测定透明圈 以求解其去除率，复筛出好氧解油脂能力强劲的芽孢杆菌。