一种血清学检测与定量分析的方法

摘要

本发明涉及一种血清学检测定量分析方法。在半对数坐标图像上，以X轴为靶物质浓度的对数值，Y轴为信号强度及信号饱和度指数，根据T1、T2时点测得系列参比标准品实验信号S1、S2及SSDI绘制S1、S2 HB双向剂量反应曲线及SSI曲线；采用拟合法确证HB双向曲线中函数x与y以及SSDI的关系；确定函数图像分析的界点A1、A2及Q，构成复合HB双向剂量反应曲线图像分析体系；根据被分析标本所测得的实验信号Y，及SSDI值与Q值比较的结果，在相应的曲线区段进行函数x的查读，将查读的对数结果转化为实际检测浓度并报道实验结果。所建立的实验方法能拮抗浓度依赖性Hook效应干扰，并能极大拓宽靶物质定量检测范围。

主权项

一种血清学检测定量分析的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)实验过程：在存在标记与未标记对应免疫反应试剂(抗原及抗体)及信号生成相关试剂的实验孔(管，或其他载体容器)中分别加入当次参比标准品、拟合样品、阴阳性对照或待测标本，混合后放置，以使其发生免疫反应，并产生可供测定的实验信号，于发生免疫反应的T1、T2时点分别进行实验信号S1、S2的检测；将其输入专项实验分析系统进行处理，并按照实验者指令输出实验结果；2)函数关系的拟合：(1)同上实验条件下，采用超过100个浓度点样本，浓度范围设定涵盖整个HB双向曲线中有效分析区段图像，样本的浓度区间设定为质点间间隔0.025—0.10横轴(X轴)读数距离，对此参比标准品进行10次或以上重复实验，取每个浓度点各次检测的实验信号平均值作为该点对应的实验信号进行高密度函数拟合分析；(2)将所生成的实验信号输入人工智能分析系统，人工智能分析系统的后台路径概况：①输入T1及T2两时点检测的实验信号值S1及S2；②计算出受检标本T1及T2时点S1与S2测值的比值，即实验信号饱和度，将实验信号饱和度转换成饱和度指数(Signal Saturation degree index，SSDI)，转换方法为(S1/S2)×100×e，e为转换系数，SSDI在纵轴上的函数价值与实验信号y同；③在平面半对数坐标图像上，根据系列参比标准品测定所获取的实验信号S1及S2，分别绘制出S1及S2两条HeidelBerger双向剂量反应曲线，并将饱和度指数按照各自对应靶物质浓度依次标绘到前述半对数函数图像中，绘制出相应的信号饱和度指数曲线SSI，此三条曲线构成复合HB双向剂量反应曲线图像分析体系，其中Y轴为实验信号强度或SSDI，X轴为靶物质浓度的对数数值；④采用拟合法确证HB双向曲线中函数x与y，以及信号饱和度指数曲线SSI中函数x与SSDI的关系：通过拟合实验证实，HB双向剂量反应曲线图像中各HB双向曲线上的实测点(y)与其所对应的函数值(x)之间的关系可采用以下公式表述：$f\left(x\right)=a\times esp(-(\frac{x-b}{c})^2),$拟合效果R^2≥0.99其中x：为靶物质浓度的自然对数；α：修正参数；b：对数均值；f(x)＝实验信号(y)；c：标准差；信号饱和度指数曲线SSI上各实测点SSDI，限两HB双向曲线图像内侧点值，及其与所对应的函数值(x)之间的关系可以采用以下公式表述：f(x)＝a+b×x，拟合效果R^2≥0.95其中x：为靶物质浓度的自然对数；α：截距(当x＝0时，Y的取值本底信号的大小)；b：斜率(x变化一个单位时Y的增减量)；y＝f(x)＝SSDI＝(S1/S2)×100×e(e为转换系数)；3)拟合函数图像分析界点的确定(1)计算两HB双向曲线的顶点P1及P2，公式：P(y)＝f(x)＝μ，其中，μ＝b，即实验数据模拟出的模型参数的对数均值，为P1或P2在顶点对应的浓度对数值；(2)确认两顶点在X轴读数差值的中点Pe(公式：Pe(x)＝(P1(x)+P2(x))/2)，经Pe点对X轴做垂线M，并与S1、S2及SSI三曲线分别相交于A1、A2及Q，分别算出三者的实验信号，即y或SSDI值；(3)编程以建立以复合HB双向剂量反应曲线为参比对象的血清学均相免疫实验定量分析系统；4)浓度参比标准品及设定设定当次常规参比标准品，以步骤2建立的HB双向剂量反应曲线为基础，其浓度以大致达成双向曲线的下述线性区位为目标，具体设定包括：①本底核对参比，0靶物质，阈值设定参照；②敏感性控制参比，低浓度端，曲线正态分布的三阶导数的围起点处；③线性状态控制，左右拐点附近，正态分布曲线的围二阶导数起点处；④Y值高点控制，正态分布曲线的围一阶导数起点(即围顶点)处；⑤类Hook效应控制点设定，其浓度设定以所产生实验信号在强度上与敏感性控制参比品所产生的实验信号相对应；5)实验结果分析：(1)通过浓度参比标准品检测、数据的输入、调出适宜当次结果分析，即前述步骤2)、3)建立的数据分析系统；通过A1界点可将S1双向曲线不对称地分为左右两部分，顶点P1位于界点A1的左侧，其中右侧高x值区段为实验结果判读区段；通过A2界点可将S2双向曲线不对称地分为左右两部分，顶点P2位于界点A2的右侧，其中左侧低x值区段为实验结果判读区段；通过实验标本序号的输入锁定待分析实验标本实测与计算数据；通过测定标本SSDI与Q值的比较确定待测标本参比分析的曲线及相应区段，即当测定标本的SSDI大于Q值时，根据其T2时点测值y在S2曲线的左侧区段查读实验结果；当测定标本SSDI小于Q值时，根据其T1时点测值y在S1曲线的右侧区段查读实验结果；(2)采用输入参比标准品检测数据所调出的前述步骤2)、3)建立的数据分析系统中的阈值对上述5)①项分析结果做进一步分析，其S2测值小于对应曲线阈值(阴性孔均值乘以2.1倍)者为阴性；(3)采用输入参比标准品检测数据所调出的前述步骤2)、3)建立的数据分析系统中的类Hook效应控制点对上述步骤5)①项分析结果做进一步分析，其S1测值小于对应曲线类Hook效应控制点参比信号者为存在类Hook效应影响的实验标本，靶物质浓度高于类Hook效应控制点，定量分析结果仅供参考，该结果以定性方式报道为超高浓度阳性；(4)经上述选择分析后，根据被分析标本所测得的实验信号Y，在相应的曲线区段进行函数x的计算，将计算的对数结果转化为实际检测浓度并报道实验结果。