检测同型半胱氨酸代谢相关SNP位点的试剂盒及其扩增方法和检测方法

摘要

本发明公开了一种利用多重PCR技术结合SNP敏感性分子开关技术检测同型半胱氨酸代谢相关SNP位点的检测试剂盒及其扩增方法和检测方法。所述试剂盒对同型半胱氨酸代谢相关的四个SNP位点进行分型，包括：MTHFR基因rs1801133 SNP位点、MTR基因rs1805087 SNP位点、MTRR基因rs1801394SNP位点和CBS基因rs5742905 SNP位点。所述试剂盒包含野生型2×扩增缓冲液、突变型2×扩增缓冲液、聚合酶、细胞裂解液和甘油，两种缓冲液中分别含有对应SNP野生型和突变型表型的序列特异性引物和内参引物，可在两个多重PCR反应中完成对上述四个SNP位点的分型，从而了解受试者同型半胱氨酸代谢能力和叶酸、VB12和VB6需求。

主权项

一种检测同型半胱氨酸代谢相关SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测MTHFR基因rs1801133位点的两个正向引物及一个反向引物、检测MTR基因rs1805087SNP位点的两个正向引物及一个反向引物、检测MTRR基因rs1801394SNP位点的两个正向引物及一个反向引物和检测CBS基因rs5742905SNP位点的两个正向引物；所述检测MTHFR基因rs1801133位点的引物碱基序列如下所示：正向野生型引物：AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGG正向突变型引物：AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGA反向共用引物：TGCTGTCATCCCTATTGGCAGGTTACCC所述检测MTR基因rs1805087位点的引物碱基序列如下所示：正向野生型引物：TACCACTTACCTTGAGAGACTCATAATGGT正向突变型引物：TACCACTTACCTTGAGAGACTCATAATGGC反向共用引物：CCAGTCCCTTCTTTGGCTTGTGCAG所述检测MTRR基因rs1801394位点的引物碱基序列如下所示：正向野生型引物：CCATGTACCACAGCTTGCTCACAT正向突变型引物：CCATGTACCACAGCTTGCTCACAC反向共用引物：TGTGGCTCAAGTTTTGTTCAGGTTCTTG所述检测CBS基因rs5742905位点的引物碱基序列如下所示：正向野生型引物：ACCCTTCGGGATCCACCCCAA正向突变型引物：ACCCTTCGGGATCCACCCCAG反向共用引物：TTGGGTTTCTCATCCTGCCTCTGAGG。