一种检测L-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种检测L-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用。首先，在链霉亲和素(streptavidin，SA)修饰的磁珠(magneticheads，MBs)上固定生物素(biotin)修饰的单链DNA1，得到DNA1-MBs复合物。另外，用DNA2和转化酶修饰胶体金，得DNA2-转化酶修饰胶体金。再把DNA1-MBs和DNA2-转化酶修饰胶体金混合，得到L-组氨酸传感器。再将一定量的L-组氨酸加入所制备的L-组氨酸传感器中反应一段时间，通过磁性分离，取上清液并加入蔗糖，反应一段时间，转化酶把蔗糖转化为葡萄糖，直接用血糖仪检测生成的葡萄糖，通过检测葡萄糖的含量来检测L-组氨酸的含量。本发明的传感器具有高的灵敏度、选择性；以血糖仪为检测仪器和磁珠为载体，操作简单，检测仪器体积小、价格便宜、方便携带。

主权项

一种检测L‑组氨酸的生物传感器的制备方法，包括以下步骤：(1)将0.1～10.0μmol巯基修饰DNA2在TCEP溶液中活化，再加入到1mL转化酶修饰胶体金溶液中，轻微震荡8～24小时，然后在8000～16000转/分转速下离心30分钟，用1mL的PBS洗涤三次，再将沉淀分散于1mL的PBS中，得DNA2修饰转化酶‑胶体金，置于4℃下储存；(2)在20～200μL链霉亲和素修饰的磁珠中加入biotin修饰的单链DNA1，37℃下反应后，并用PBS洗涤两次，去除上清液，沉淀分散于1mL PBS缓冲液中，即得DNA1‑链霉亲和素修饰的磁珠DNA1‑MBs；(3)取1mL的DNA1‑链霉亲和素修饰的磁珠，加入1mL的DNA2修饰转化酶‑胶体金，室温震荡反应，然后磁性分离，并用PBS洗涤3次，得L‑组氨酸生物传感器；其中：所述的转化酶修饰胶体金按如下的方法制备而成：取10～200μL的转化酶加入装有1mL的胶体金的离心管内，在37℃下反应10～80分钟，在8000～16000转/分转速下离心20分钟，去除未被结合的酶，再用50μL的PBS洗涤3次，得转化酶修饰胶体金，即转化酶‑胶体金；所述的DNA1的部分序列为：5’‑GAG TGA TAT GAA GGA TGG GCG TGT CGG GGC TAT TCT CTA C‑biotin‑3’；所述的DNA2的部分序列为：5’‑GTA GAG AAG GATr ATC ACT CAG C‑SH‑3’；其中所述的胶体金按如下方法制备而成：先把制备与储存胶体金溶液所用的玻璃容器容量瓶、棕色广口瓶和圆底烧瓶用王水泡洗30分钟，然后用二次水冲洗干净，烘干备用；在100mL圆底烧瓶中加入50mL 1mmol/L的HAuCl₄，搅拌加热至沸腾，然后快速加入5mL 38.8mmol/L的Na₃C₆H₅O₇，再加热10分钟，搅拌15分钟，冷却至室温后用0.8μm的尼龙膜过滤器过滤，转移到棕色瓶中于4℃下保存；用扫描电镜观察胶体金的粒径为20‑25nm；其中所述PBS缓冲溶液为0.2M pH＝7.4，其配置方法为：称取0.2g KH₂PO₄、8.0g NaCl、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O及0.2g KCl溶解于1L水中即得。