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Un método de mutagénesis de paso a través de un ácido nucleico que codifica un polipéptido prototipo de interés, que comprende: a) seleccionar una o más regiones diana de aminoácidos prototipo en el polipéptido prototipo de interés, codificado por el ácido nucleico; b) para cada una de las regiones diana, predeterminar un aminoácido para que se incorpore a la región diana, en lugar de los aminoácidos prototipos; y c) sintetizar una mezcla de oligonucleótidos que contiene una secuencia de nucleótidos para cada región diana, donde cada oligonucleótido contiene, en cada posición de secuencia en la región diana, un nucleótido que se requiere para la síntesis del aminoácido prototipo del polipéptido, o un nucleótido predeterminado que se requiere para la síntesis del aminoácido predeterminado, donde, durante la síntesis, la relación entre nucleótidos prototipo disponibles y nucleótidos predeterminados disponibles, es igual o mayor que 4:1, donde dicha relación se determina mediante el uso de ladistribución binomial y donde dicha distribución de probabilidad tiene en consideración el número (N) de aminoácidos en la región o regiones diana, y la probabilidad (P) de éxito en incorporar los nucleótidos que codifican el aminoácido predeterminado, y donde X (número total de aminoácidos mutados en una secuencia de longitud N), es menor que N.
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