甜菜上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法

摘要

本发明公开了一种甜菜离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法。本发明还公开了一种斩首的(decapitated)上胚轴外植体。本发明利用上胚轴外植体及斩首的上胚轴外植体，建立了直接诱导多芽发生、伸长和生根的不依赖基因型、简单、快速的甜菜离体培养再生植株技术，通过培养基配方和碳源的优化筛选，使外植体的褐化程度降到最轻，一个外植体最大发生芽数≥3，再生芽生根率在90％以上，获得具有根茎叶完整的再生植株仅需3～4个月的时间，畸形苗率低，为生产上应用的甜菜品种进行基因工程遗传改良奠定基础。

主权项

1. 一种甜菜离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法，其特征在于，所述的培养方法具体步骤包括，A：上胚轴外植体及斩首上胚轴外植体的制备步骤：将消毒的种子先在灭菌水中浸泡12～48hr，然后沥干水挤脱种皮置于种子发芽培养基中黑暗处培养1～5天，将无菌苗切下并去除子叶和去除距子叶节下4～10mm的下胚轴及胚根，保留部分获得上胚轴外植体，培养15～20天后，切去长出的芽，获得斩首的上胚轴外植体；B：将获得的上胚轴外植体及斩首上胚轴外植体接种于多芽诱导培养基中，其多芽诱导培养基是由MS培养基的无机盐、B5培养基的维生素、0.8mg/l～2.5mg/l的6-BA、0.07mg/l～2.0mg/l的NAA和30g/l的葡萄糖组成，不受基因型限制，培养25～30天后见多芽发生；C：在再生芽的伸长中，以不添加任何激素的多芽诱导培养基用作芽伸长培养基，多芽发生后立即转入芽伸长培养基；防止再生芽发生落叶的早衰症状；D：将长1cm的再生芽单个分离，接种于生根培养基中培养15～20天有根发生，培养25～30天，生根率达到70～90％，不受基因型限制；其中，生根培养基是由MS培养基盐浓度的四分之一，添加IBA3～12mg/l和20g/l的蔗糖组成。