一种适合双向电泳的野山参蛋白质提取方法

摘要

本发明公开了一种适合双向电泳的野山参蛋白质提取方法。以野山参为试材，在液氮中充分研磨后，转移到离心管中。加-20℃预冷的丙酮溶液，洗涤样品粉末3次，离心收集沉淀，在室温干燥20min，得到野山参蛋白粗提物。再将野山参蛋白粗提物溶解于裂解缓冲液中，进行超声细胞破碎，离心取上清，即可获得高质量的野山参蛋白溶液。本发明提取的野山参蛋白用于双向电泳的方法简单、快速，可获得重复性好，分辨率高的电泳图谱，有利于后续的质谱分析鉴定蛋白，为野山参的蛋白质组学研究提供了技术支撑。

主权项

一种适合双向电泳的野山参蛋白质提取方法，其特征是具体步骤如下：(1)取新鲜野山参，在液氮中充分研磨后，称取液氮研磨后粉末0.15g，转移到离心管中；(2)加入 20℃预冷的含有0.07％(v/v)β 巯基乙醇的丙酮溶液1ml，混匀后于 15℃ 25℃静置1 2h，2℃ 8℃、8000rpm离心15min，弃上清，取沉淀；(3)重复步骤(2)3次，直至上清无色，室温干燥沉淀20 30min，得到蛋白粗提物；(4)将野山参蛋白粗提物溶解于含有7mol/L尿素、2mol/L硫脲、0.02g/ml CHAPS、20mmol DTT、1mmol/L PMSF、1％(v/v)蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液中，并且野山参蛋白提取物与裂解缓冲液的质量体积比为100mg/300μl 100mg/400μl；(5)将加入蛋白粗提物的裂解缓冲液置于冰水混合物中，超声探头浸入样品溶液中心部，100W 200W超声20min 40min，然后在摇床上室温下震荡1h，15000rpm离心15min，收集上清液，即得到适合于双向电泳的野山参蛋白样品液。