零背景克隆载体及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了制备零背景克隆载体的方法及应用。其中，制备零背景克隆载体的方法，包括以下步骤：提供SEQ ID NO：6所示的DNA片段；以pUC19质粒为模板，利用SEQ ID NO：7-8所示的引物进行第一PCR扩增，以便获得pUC19载体片段；将DNA片段与pUC19载体片段进行同源重组，以便获得载体骨架；将载体骨架转化感受态细胞并提取质粒，以便获得零背景克隆载体的前载体；以及采用EcoRV酶对零背景克隆载体的前载体进行酶切，以便得到零背景克隆载体。该方法获得的载体可直接用于平末端产物的连接，载体自连的背景低，克隆的阳性率高，无需蓝白筛选，能在短时间内实现快速有效的克隆，克隆效率高，效果好。

主权项

一种制备零背景克隆载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：提供SEQ ID NO：6所示的DNA片段；以pUC19质粒为模板，利用SEQ ID NO：7‑8所示的引物进行第一PCR扩增，以便获得pUC19载体片段；将所述DNA片段与所述pUC19载体片段进行同源重组，以便获得载体骨架；将所述载体骨架转化感受态细胞并提取质粒，以便获得零背景克隆载体的前载体；以及采用EcoRV酶对所述零背景克隆载体的前载体进行酶切，以便得到零背景克隆载体。