一种核酸内切酶Ⅷ活性测定方法

摘要

本发明公开了一种核酸内切酶Ⅷ活性测定方法，所述方法包括：首先根据单链DNA模板合成一段引物，其中所述引物由两部分构成，5’端的正常引物部分和3’端的末端封闭引物部分，该两部分之间以dUTP相连；将该合成引物与单链DNA模板退火形成复合物；随后在尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)和核酸内切酶Ⅷ(EndoVIII)的作用下在引物的dUTP位置产生脱嘧啶位点；接着利用具有链置换活性的聚合酶合成双链DNA，然后测定反应体系中双链DNA和单链DNA的相对量，并根据该检测结果推导出核酸内切酶Ⅷ活性程度，其中核酸内切酶Ⅷ活性程度与反应体系中双链DNA的量成正相关。与现有技术相比，本发明的方法无放射性污染，操作简单便捷，可以对EndoⅧ活性进行定量的检测分析。

主权项

一种核酸内切酶Ⅷ活性测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：首先根据单链DNA模板合成一段引物，其中所述引物由两部分构成，5’端的正常引物部分和3’端的末端封闭引物部分，该两部分之间以dUTP相连；将该合成引物与单链DNA模板退火形成复合物；随后在尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)和核酸内切酶Ⅷ (EndoVIII)的作用下在引物的dUTP位置产生脱嘧啶位点；接着利用具有链置换活性的聚合酶合成双链DNA，然后测定反应体系中双链DNA和单链DNA的相对量，并根据该检测结果推导出核酸内切酶Ⅷ活性程度，其中核酸内切酶Ⅷ活性程度与反应体系中双链DNA的量成正相关。