Paa蛋白及由其制备的抗体与应用

摘要

本发明公开了Paa蛋白及由其制备的抗体与应用。本发明提供Paa蛋白在制备具有如下1）-3）中至少一种功能的产品中的应用：1）预防和/或治疗由病原菌EHEC引发疾病；2）降低病原菌EHEC肠道感染损伤；3）降低病原菌EHEC在肠道定值力；所述Paa蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。本发明的实验证明，本发明通过基因工程技术克隆获取Paa蛋白的编码基因、重组表达和纯化Paa蛋白，体内外评估Paa蛋白的免疫学功能等实验研究，Paa蛋白可被O157：H7感染血清所特异的、高效的识别，是EHEC病原菌重要的核心抗原，可作为抗原试剂用于感染诊断；Paa蛋白免疫的小鼠可以抵制O157：H7攻毒，表明该蛋白可以作为针对EHEC引发疾病的疫苗。

主权项

由Paa蛋白作为抗原制备的抗体在制备提高宿主抗病原菌EHEC O157：H7 EDL933感染产品或提高宿主抗病原菌EHEC O157：H7 EDL933黏附产品中的应用；所述抗体为多克隆抗体； 所述Paa蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2；所述多克隆抗体按照如下方法制备：将浓度达到1mg/ml、纯度达到95%以上的Paa纯化蛋白作为抗原，免疫雄性、2.5kg大耳白兔；分别在第四周和第八周加强免疫，免疫剂量是第四周25μg/只，第八周50μg/只；每次免疫后一周取耳缘静脉血，ELISA检测血清抗体效价分别为10³和10⁶，当效价达到并稳定在1:10⁶以上，对大耳白兔心脏取血，5000g离心10min分离血清，并用2μm一次性滤器过滤血清，过滤后的血清用亲和层析的方法进行纯化得到抗Paa多克隆抗体。