一种固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法

摘要

本发明提供了一种片段缩合制备胸腺肽α1的方法，属于生化技术领域。该方法利用高荷载量（≥0.8mmol/g树脂）的树脂为起始原料，先采用标准的固相多肽合成(SPPS)技术合成选定结构的高纯度肽片段，再采用固相和/或液相片段缩合技术连接肽片段，从而获得高纯度(＞99%)的目标肽。相比较固相合成胸腺肽α1的工艺，本发明避免了12位以后氨基酸偶联率低的问题，大大提高了胸腺肽α1的收率（达25～30%）；同时固相合成的肽片段不必纯化；最终用高效液相色谱纯化胸腺肽α1，降低制备难度，减少制备次数，大大简化了后处理工艺，降低了胸腺肽α1的合成成本，有利于实现规模化、产业化生产。

主权项

一种固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，包括以下工艺步骤：（1）将结构为Fmoc‑KEKKEVVEEAEN‑Y的侧链保护肽的氨基端去保护，得NH₂‑KEKKEVVEEAEN‑Y；（2）采用液相片段缩合方法使结构为NH₂‑KEKKEVVEEAEN‑Y的侧链保护肽与结构为Fmoc‑EITTKDL‑COOH的侧链保护肽缩合，得到结构为Fmoc‑EITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y的羧基保护的侧链保护肽；再脱去氨基Fmoc保护，得肽NH₂‑EITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y；（3）采用液相片段缩合方法将肽NH₂‑EITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y与结构为Fmoc‑SDAAVDTSS‑COOH的侧链保护肽缩合，产生结构为Fmoc‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y羧基保护的侧链保护肽，然后脱去氨基端Fmoc保护，并将氨基末端乙酰化，产生结构为Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y羧基保护的侧链保护肽；或采用液相片段缩合方法将肽NH₂‑EITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y与结构为Ac‑SDAAVDTSS‑COOH的侧链保护肽反应，产生结构为Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y羧基保护的侧链保护肽；（4）将肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y侧链保护肽的侧链和羧基去保护，得目标肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑COOH；上述Y为叔丁酯基、苄酯基、对硝基苄酯基或三苯甲基。