一种食品级中性蛋白酶的提纯方法

摘要

本发明公开了一种食品级中性蛋白酶的提纯方法,包括如下步骤：1）采用枯草芽孢杆菌 AS1.398菌种发酵，得到中性蛋白酶发酵液；往发酵液中添加絮凝剂；2）板框过滤：将中性蛋白酶发酵液进行板框过滤收集滤液;3）离心：将板框过滤收集的滤液进行高速离心;4）粗滤：将收集的离心液进行粗滤；5）精滤：采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩；6）添加酶活保护剂：添加海藻糖和β-环状糊精;7）沉淀:添加食用乙醇，收集中性蛋白酶沉淀部分;8）真空干燥：真空干燥，即可得到食品级中性蛋白酶。本发明能有效的解决中性蛋白酶活损失问题，酶活收率明显提高，成品提取总收率达到70%以上，卫生指标符合食品级要求，可应用于食品加工行业。

主权项

一种食品级中性蛋白酶的提纯方法, 其特征在于包括如下步骤：1）采用枯草芽孢杆菌 AS1.398菌种进行发酵，得到中性蛋白酶发酵液；然后往发酵液中添加絮凝剂，搅拌均匀，静置30分钟，使杂质与絮凝剂结合成团状；2）板框过滤：将絮凝反应完成后的中性蛋白酶发酵液进行板框过滤，过滤压力控制在0.6‑0.8MPa，收集滤液;3）离心：将板框过滤收集的滤液进行高速离心，转速为：10000rpm,进料流速为80L/h，收集离心液;4）粗滤：将收集的离心液进行粗滤，采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤，聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um和0.1um，操作压力0.1MPa；要求料液经过两次膜过滤，膜孔径分别为0.22um和0.1um，除去杂质和细菌；5）精滤：将经过粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩，聚砜超滤膜的截留分子量为10K，操作压力0.1MPa；得到中性蛋白酶浓缩液；6）添加酶活保护剂：往步骤5）得到的中性蛋白酶浓缩液中添加酶活保护剂，搅拌均匀；其中，所述酶活保护剂包括海藻糖和β‑环状糊精，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8‑1.2%，β‑环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5%;7）沉淀:往经过步骤6）处理后的中性蛋白酶浓缩液中添加食用乙醇，边添加边缓慢搅拌，使得中性蛋白酶分子结晶沉淀出来，收集絮状的中性蛋白酶沉淀部分;8）真空干燥：将步骤7）收集得到的絮状的中性蛋白酶沉淀部分进行真空干燥，即可得到食品级中性蛋白酶。