一种固相片段法合成比伐卢定的方法

摘要

本发明提供一种固相片段法合成比伐卢定的方法。首先用固相逐步法合成一个13肽片段I-Wang Resin，一个N端被Fmoc保护的7肽片段II，二者采用固相片段法偶联合成比伐卢定-Wang Resin；最后经过脱保护、裂解、纯化，冷冻干燥得到纯比伐卢定。该方法相对已有的固相逐步法或液相片段法来说具有工艺操作简单、收率、纯度高、环境污染小、易大规模化生产等优点。

主权项

一种固相片段法合成比伐卢定的方法，包括以下步骤：1)由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang Resin和Fmoc‑Leu‑OH反应制备Fmoc‑Leu‑Wang Resin，再按序列依次连接12个含Fmoc保护基氨基酸，得13肽片段I‑Wang Resin；其中Fmoc‑Leu‑OH和Wang Resin在DIC+HOBt+DMAP作用下反应制备Fmoc‑Leu‑Wang Resin；固相逐步合成13肽片段I‑Wang Resin，其中Fmoc保护的氨基酸为：Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Ile‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Phe‑OH、Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH、Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH和Fmoc‑Gly‑OH；2)由替代度为0.4～0.9mmol/g的2‑Chlorotrityl Chloride Resin和Fmoc‑Gly‑OH反应制备Fmoc‑Gly‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin，再按序列依次连接剩余的6个含Fmoc保护基氨基酸，得7肽片段II‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin，裂解得Fmoc保护N端的7肽片段II；其中Fmoc‑Gly‑OH和2‑Chlorotrityl Chloride Resin在DIEA作用下反应制备Fmoc‑Gly‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；其中Fmoc保护的氨基酸为：Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Arg(pbf)‑OH、Fmoc‑Pro‑OH和Fmoc‑D‑Phe‑OH，裂解试剂为TFA‑DCM；3)13肽片段I‑Wang Resin与7肽片段II以固相片段法合成比伐卢定‑Wang Resin，其中活化试剂为HOBt、HBTU和DIEA，经脱保护，裂解，纯化冷冻干燥得纯比伐卢定。