一组耐螯合剂乙二胺四乙酸的重组碱性木聚糖酶及其构建方法

摘要

本发明公开了一组耐EDTA的碱性木聚糖酶和编码基因及其构建方法。采用定点诱变技术将碱性木聚糖酶酶编码基因xynA突变，得到突变基因xynA-M-W19Y、xynA-M-W19F和xynA-M-W19H，将其在E.coli BL21(DE3)进行诱导、表达、纯化，将纯化后的酶进行酶活测定，得到的木聚糖酶突变体XynA-M-W19Y、XynA-M-W19F和XynA-M-W19H具有较好的耐EDTA能力，其中在pH9.2，60℃，5mM EDTA的条件下，突变体W20Y的酶活比野生型XynA高近20％。这为碱性木聚糖酶的广泛应用奠定了良好的基础。

主权项

一组耐EDTA的重组碱性木聚糖酶，其特征在于在GenBank收录号EU421717.1中含有的碱性木聚糖酶基因xynA，对应成熟木聚糖酶基因xynA‑M，分别设计点突变引物(FP1、RP1、FP2、RP2、FP3、RP3)进行定点诱变，将公布的基因56、57位的鸟嘌呤G分别变成腺嘌呤A和胸腺嘧啶T，将56、57位的鸟嘌呤G分别变成胸腺嘧啶T和胞嘧啶C，将55、56和57位的胸腺嘧啶T、鸟嘌呤G分别变成胞嘧啶C、腺嘌呤A和胞嘧啶C，使得其编码氨基酸序列成熟肽的第19位的色氨酸W(TGG)分别突变成酪氨酸Y(TAT)、苯丙氨酸F(TTC)、组氨酸H(CAC)，获得一组耐5～10mM EDTA的重组碱性木聚糖酶XynA‑M‑W19Y、XynA‑M‑W19F和XynA‑M‑W19H。