一种斑马鱼代谢物的提取方法及其应用

摘要

一种斑马鱼代谢物的提取方法，步骤如下：1)将斑马鱼样品用生理盐水冲洗干净后迅速浸没于液氮中保存备用；2)将样品在-80℃温度下研磨变成匀质浆体；3)将浆体状样品加入-20℃预冷的提取液中，进行两次微波萃取，将离心后收集两次上清液混合后加入灭菌去离子水，经离心、静置、干燥后得到混合溶液；4)将混合溶液真空干燥后，通过甲氧氨基盐酸盐-吡啶溶液、N-甲基-N-(三甲基硅烷)-三氟乙酰胺两步法进行衍生化，得到斑马鱼代谢物衍生化样品。本发明的优点是：该斑马鱼代谢物的提取方法简单、准确，易于实施，用于斑马鱼暴露于低浓度纳米材料实验，可使斑马鱼毒性检测的灵敏性提高。

主权项

一种斑马鱼代谢物的提取方法，其特征在于步骤如下：1)将斑马鱼样品用生理盐水冲洗干净后准确称重，然后迅速浸没于液氮中保存备用；2)将上述斑马鱼样品置于盛有液氮的研钵中在‑80℃温度下研磨5分钟至斑马鱼组织变成匀质浆体；3)将上述浆体状斑马鱼样品加入‑20℃预冷的提取液中，在40℃温度下微波萃取30分钟，微波萃取功率为(样品罐数+2)×100W，离心后收集第一次上清液，然后在固体残留物中再加入相同量的上述‑20℃的提取液，继续在40℃温度下微波萃取30分钟，离心后收集第二次上清液；4)将第一次上清液与第二次上清液混合，在混合液中加入灭菌去离子水，4000rpm下离心5分钟，静置5分钟后溶液分层，上层溶液是甲醇/水相，下层溶液为氯仿相，两相分离后将氯仿相用氮气吹干，然后将甲醇/水相转移至已干燥的氯仿相中，得到混合溶液；5)将上述混合溶液放入冷冻干燥机内以‑30℃—‑50℃真空干燥后，采用两步法进行衍生化：首先加入浓度为20mg/mL的甲氧氨基盐酸盐‑吡啶溶液，密封后涡旋1分钟，后将其在3000rpm下离心1分钟，再在30℃下温浴90分钟，然后加入硅烷化试剂N‑甲基‑N‑(三甲基硅烷)‑三氟乙酰胺(MSTFA)，37℃下温浴30分钟，得到斑马鱼代谢物衍生化样品并转移到适合GC‑MS分析的内衬管中保存。