一种丝状真菌环境扫描电镜样品制备方法

摘要

一种丝状真菌环境扫描电镜样品制备方法，它涉及一种丝状真菌环境扫描电镜样品制备方法。方法：1.固体培养基制备；2.铝箔片的制备；3.培养基和铝箔片的灭菌；4.接种和插片；5.铝箔爬片的上台；6.环境扫描电镜的观察。本发明优点在于：(1)以金属薄片代替一般的玻璃盖玻片来作为爬片，增加了观察样品和样品台之间的导电性，减少了样品的放电现象，使样品在相同的放大倍率下更加清晰逼真；(2)样品可以被放大更大的倍率；(3)铝箔爬片不用分开，可以整个的放到样品台上，这样能够更加原位地观察菌丝和孢子生长状态。

主权项

一种丝状真菌环境扫描电镜样品制备方法，其特征在于：丝状真菌环境扫描电镜样品制备方法按以下步骤实现：(1)固体培养基的制备：熬制普通的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PAD)培养基，每100ml加入1.5g琼脂粉，将pH调至6.5‑7.0，然后倒入直径12mm的玻璃培养皿中，培养基的厚度4‑6mm。(2)铝箔片的制备：取微波炉用铝箔，用剪刀将其剪成边小正方形。(3)培养基和铝箔片的灭菌：将铝箔和固体培养基在高压锅内灭菌，灭菌条件为温度为121℃、压力103kPa，灭菌时间30min。(4)接种和插片：在超净工作台中进行丝状真菌的接种，将丝状真菌接种于培养基的中心点，在培养基上插已灭菌的铝箔片，然后用Parafilm膜密封，置于27‑29摄氏度的培养箱中黑暗培养，当露出铝箔片的2／3已经被菌丝覆盖时，停止培养。(5)铝箔爬片上样品台：小心取出一面已经生长有丝状真菌菌丝体和孢子的铝箔片，把没有菌丝和孢子生长的一面粘到贴有导电双面胶的上样台上。(6)环境扫描电镜观察把粘有铝箔爬片的样品台置于环境扫描电镜中进行观察，使用环境扫描电镜在环境真空模式下，使用30kV电压进行观察和照相。