一种镇痛活性多肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种具镇痛活性多肽的制备方法，属于基因工程领域；所述制备方法如下：根据大肠杆菌密码子使用频率优化美洲商陆抗菌肽PaAMP1基因序列，经化学合成后连入原核表达载体pET-32a载体，然后将重组质粒导入大肠杆菌Origami（DE3）菌株，经IPTG诱导后，实现重组PaAMP1的高效可溶性表达；采用镍离子亲和层析方法分离纯化重组PaAMP1；本发明通过小鼠醋酸扭体试验首次证实重组PaAMP1具有显著的镇痛活性，在镇痛领域具有潜在的应用价值；由于PaAMP1来源于植物美洲商陆，该材料易于大规模种植，其资源远比海洋芋螺资源丰富，因此，有望从大规模种植的美洲商陆中工业化提取天然的镇痛多肽，满足药物研发及临床需求。

主权项

一种镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：（1）优化植物抗菌肽PaAMP1基因序列；（2）合成优化后的PaAMP1基因，经BamHI/HindIII双酶切后，连入经同样酶切的原核表达载体pET‑32a，得到重组质粒pET‑32a‑PaAMP1，将重组质粒导入宿主菌，得到基因工程菌株；（3）将得到的基因工程菌株接种于含氨苄青霉素的LB培养基震荡培养，经IPTG诱导后高效表达产生可溶性重组PaAMP1；（4）用镍离子亲和层析纯化后获得重组活性多肽PaAMP1。