一种表达CD133的重组腺病毒及其用途

摘要

本发明公开了一种表达CD133的重组腺病毒及其用途，所述重组腺病毒携带人CD133基因，能够在哺乳动物细胞中表达人CD133蛋白。本发明的重组腺病毒通过携带人CD133基因的重组穿梭质粒与病毒骨架质粒同源重组得到。本发明的重组腺病毒在哺乳动物细胞中表达人CD133蛋白的效率高、产量大。制备本发明重组腺病毒的方法简单、重复性强。

主权项

一种表达CD133的重组腺病毒，其特征在于，其携带人CD133基因，所述人CD133基因的序列如SEQ ID NO：1所示；构建所述重组腺病毒所用的穿梭质粒为pShuttle‑CMV；构建所述重组腺病毒所用的病毒骨架质粒为pAdeasy‑1；构建所述重组腺病毒所用的包装细胞为人胚肾293细胞；其表达人CD133蛋白，所述人CD133蛋白的序列如SEQ ID NO：2所示；所述重组腺病毒的制备方法包括将重组腺病毒质粒线性化后转染人胚肾293细胞，至出现明显细胞病变效应后，收集细胞，反复冻融，离心得到包含所述重组腺病毒的上清液；所述线性化采用PacI酶切线性化；‑70℃和37℃交替条件下反复冻融2～4次；还包括将所述上清液感染人胚肾293细胞以扩增所述重组腺病毒；所述重组腺病毒质粒的构建方法包括：将线性化的重组穿梭质粒pShuttle‑CMV‑CD133转化包含病毒骨架质粒pAdeasy‑1的感受态大肠杆菌BJ5183进行同源重组，筛选阳性克隆，并从所述阳性克隆中提取所述重组腺病毒质粒；其中，所述线性化为PmeI酶切线性化；所述筛选阳性克隆为使用含卡那霉素的LB培养基平板筛选；还包括将所述重组腺病毒质粒转化感受态大肠杆菌DH10B，并大量抽提质粒备用。