重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白及该蛋白抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白及其重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的制备方法，属于生物科学和运载蛋白技术领域重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的制备方法包括以下步骤：NGAL抗原表位的分析；重组NGAL的合成；重组NGAL的分离纯化；制备兔抗重组NGAL蛋白抗体；收集、分离得到含有抗体的抗血清，纯化抗体，即得到抗NGAL蛋白抗体。采用该制备方法解决了天然全长蛋白制备多抗产量低的问题，同时采用本发明的制备工艺制备的抗体其特异性良好，解决了现有的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体不能全部满足用于免疫印迹、免疫组织化学实验和酶联免疫吸附实验的问题。

主权项

一种重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL抗原表位分析：通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白重组表达，所述目的片段为序列表中SEQ ID NO.1所述蛋白质序列；(2)重组NGAL的合成：将选定的目的片段通过PCR扩增后插入到表达载体，然后进行转座，最后转染宿主细胞，病毒在复制的同时，目的蛋白也将得到表达；(3)重组NGAL的分离纯化:采用Ni柱纯化，包括蛋白提取和蛋白纯化；(4)制备抗重组NGAL抗体：用步骤(3)纯化后的重组NGAL作为抗原去免疫兔子或羊，得到含抗重组NGAL抗体的抗血清；所述步骤(2)中表达载体选自为pFastBacTM 1、pFastBacTM HTA、pFastBacTM HTB、pFastBacTM HTC和pFastBacTM Dual；所述步骤(2)中转染的宿主细胞为昆虫细胞系，所述昆虫细胞系为昆虫sf9细胞系。