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一种养殖麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：A、养殖麝香凝胶电泳分析样品的制备称取养殖麝香样品0.003～0.008重量份，加入1体积份乙醚，超声提取15～25min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份1×电泳上样缓冲液，超声提取15～25min，在4500rpm，10℃条件下离心15～25min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴3～8min，即得电泳样品；B、Tricine‑SDS‑PAGE凝胶电泳分析方法(1)电泳溶液准备：(a)去离子水溶解100～150重量份Tris，用HCl调PH值至7～9，定容至500体积份，制得10×正极缓冲液；(b)去离子水溶解50～70重量份Tris，80～100重量份Tricine，3～8重量份SDS，定容至500体积份，制得10×负极缓冲液；(c)去离子水溶解150～200重量份Tris，1～2重量份SDS，用HCl调PH值至7～9，定容至500体积份，制得3×凝胶缓冲液；(d)40～60％丙烯酰胺，1～2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；(e)40～60％丙烯酰胺，1～5％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；(f)0.2～1体积份1mol/L，PH为6.8的Tris‑HCl，2～4体积份甘油，1～3体积份10％SDS，0.6～1体积份β巯基乙醇，0.5～1.5体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得6×上样缓冲液；(g)0.2～1体积份1mol/L，PH为6.8的Tris‑HCl，2～4体积份甘油，1～3体积份10％SDS，0.6～1体积份β巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得1×上样缓冲液；(2)凝胶制备：分离胶3体积份：取上述制得的3×凝胶缓冲液1体积份，0.2～0.6重量份甘油，0.5～1.5体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2～4体积份，临 用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；夹层胶3体积份：取上述制得的3×凝胶缓冲液0.5～1.5体积份，0.5～0.8体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2～4体积份,临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；浓缩胶2体积份：0.4～0.6体积份3×凝胶缓冲液，0.1～0.2体积份3C储液，去离子水稀释至1～3体积份，临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；(3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处(4)染色方法采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制：固定液：量取甲醇30‑60体积份，冰醋酸5‑20ml，加双蒸水稀释至100ml；染色液：称取0.5～1.0重量份AgNO<sub>3</sub>溶于3～5体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH 15～30体积份，再加入氨水1～2体积份混匀，将制备好的AgNO<sub>3</sub>溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；显色液：0.3～0.8体积份1﹪柠檬酸，0.03～0.08体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；C、具体染色步骤：(a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定0.5～1.5h，每10～30min换一次液；(b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次5～15min；(c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色10～20min；(d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗2～4min；(e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；(f)将胶转移至终止液终止染色；(g)在蒸馏水中漂洗凝胶0.5～1.5h；(h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存；各批次养殖麝香中，出现分子量约为67kDa、7kDa的蛋白条带；养殖麝香样品中均出现分子量约为19KDa的弱染色条带。 |
