等重二甲基化标记蛋白质定量方法

摘要

本发明涉及了一种新的蛋白质定量方法-等重二甲基化标记定量法，该方法利用甲醛和氰基硼氢化钠及其各自的同位素形式进行有机组合，对肽段进行标记，使得肽段在质谱的一级谱上具有相近质荷比而在二级谱上具有不同质荷比，从而在二级谱上实现蛋白质定量分析。该方法相较于其他定量方法，该方法具有定量准确度高，精密度高和动态范围高等优点。

主权项

等重二甲基化标记蛋白质定量方法，该方法利用甲醛和氰基硼氢化钠及其各自的同位素形式进行有机组合，对蛋白质酶解产物中的肽段进行标记，使得肽段在质谱的一级谱上具有相近质荷比而在二级谱上具有不同质荷比,从而在二级谱上实现蛋白质定量分析；甲醛和氰基硼氢化钠及其同位素形式进行有机组合，对肽段进行标记，是指：肽段分别用轻标记试剂和重标记试剂进行同位素标记；轻标记试剂可以为以下三种：¹³CH₂O、NaCNBH₃，¹³CH₂O、NaCNBD₃和¹³CD₂O、NaCNBH₃；相对应的重标记试剂为CH₂O、NaCNBD₃，CD₂O、NaCNBH₃和CD₂O、NaCNBD₃；定义CH₂O、¹³CH₂O、CD₂O、¹³CD₂O为反应试剂，NaCNBH₃和NaCNBD₃还原试剂；轻重标记试剂可以为以下三组中的一组或二组以上组合：第一组¹³CH₂O、NaCNBH₃与CH₂O、NaCNBD₃，第二组¹³CH₂O、NaCNBD₃与CD₂O、NaCNBH₃，和第三组¹³CD₂O、NaCNBH₃与CD₂O、NaCNBD₃；所述一级谱相近质荷比是指含有一个氨基的肽段在MS1质荷比相差5.84mDa，含有两个氨基的肽段在MS1质荷比相差11.68mDa，通过常规的实验所使用的分辨率难以分辨这微小的差异，从而在MS1上呈现为等重状态，二级谱不同的质荷比是指轻重标记的肽段的碎片离子相差5.84mDa。