兼性减毒细菌种类及其制备和使用方法

摘要

本发明提供了兼性减毒细菌种类及其制备和使用方法。如本文所使用的术语“兼性减毒”指包含一组限定重组修饰的细菌，所述重组修饰当所述细菌在其宿主生物外部时，大体上对所述细菌通过增殖而生长的能力无影响，但是当将所述细菌引入其宿主生物，例如接种受者的宿主细胞内时，导致所述细菌增殖所必需的一个或多个基因缺失。这些重组修饰利用优先诱导基因在所述哺乳动物宿主内表达的调控序列。

主权项

一种构造细菌以使所述细菌基因组内对所述细菌的增殖必需的一个或多个基因缺失的方法，所述缺失优先在将所述细菌引入哺乳动物宿主时发生，所述方法包括：(i)向所述细菌内引入编码与所述细菌异源的重组酶，与优先诱导所述重组酶在所述哺乳动物宿主内表达的调控序列可操作地连接的核酸，和(ii)在所述细菌基因组内，在对所述细菌增殖必需的基因上游引入所述重组酶的第一附着位点，并且在对所述细菌增殖必需的基因下游引入所述重组酶的第二附着位点，以致所述重组酶在所述哺乳动物宿主内表达时，催化使两侧为所述第一和第二附着位点，对所述细菌增殖必需的基因缺失的位点特异性重组事件，其中在所述位点特异性重组事件之后，所述细菌具有增殖缺陷。