一种豆类植物病原细菌的多重检测方法及数据库

摘要

本申请公开了一种豆类植物病原细菌的多重检测方法及数据库。具体公开了运用本申请构建的数据库对菜豆晕疫病菌、菜豆细菌性萎蔫病菌、豌豆细菌性疫病菌、大豆细菌性疫病、大豆细菌性褐斑病、大豆斑疹病菌和菜豆细菌性疫病等豆类重要植物病原菌的七重特异性检测方法。本申请的多重检测方法，能同时检测豆类上七种病原细菌，提高了检测速度，为口岸检验检疫等部门提供了一种快速、灵敏、高通量的分析检测方法，可以缩短传统检测时间，提高通关速度，降低企业成本；同时对豆类作物安全生产、引种和外销提供技术保障，提高进境豆类作物及其产品疫情截获率，提高防范外来有害生物入侵能力，具有重要实用性和技术性。

主权项

一种豆类植物病原细菌的多重检测方法，其特征在于：包括以下步骤，(1)在无菌条件下取受检细菌1‑2mg，用无菌水进行至少一次洗涤后，离心弃上清，再用无菌水:无水乙醇体积比为1:3的溶液洗涤至少一次，离心弃上清，然后加入浓度70％的甲酸和/或浓度100％的乙腈，混匀，离心留取上清液，即受检细菌蛋白液；(2)分别取1μL受检细菌蛋白液和1μL蛋白标准样品点在质谱靶芯片上，室温晾干，再滴加1μL基质溶液覆盖在受检细菌蛋白液和蛋白标准样品上，室温晾干；每个受检细菌蛋白液至少重复4个检测点；(3)采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪对受检细菌蛋白液进行检测，每个检测点至少采集5张蛋白质峰图，将至少20张蛋白质峰图叠加制成受检细菌质谱图；(4)将步骤(3)获得的受检细菌质谱图与数据库比对，与数据库的比对结果Log(score)≥2.5时，判断为阳性；所述数据库中包含豆类上七种植物病原细菌的七个标准蛋白质指纹图谱，所述蛋白指纹图谱由植物病原细菌的多个蛋白质的质荷比及其蛋白质波峰强度系数绘制而成；第一个标准蛋白质指纹图谱为菜豆晕疫病菌的特征峰图，构成第一个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：2561.9、3329.9、3587.3、3617.9、4127.0、4369.6、4433.7、4740.2、4834.9、4939.9、5083.6、5123.3、5672.9、5826.2、5972.9、6000.5、6341.2、6651.3、6876.0、7169.8、7234.4、7262.7、7559.2、7876.0、8251.7、8430.1、8801.8、9665.9、9875.4、10198.7、10234.1、11336.5；第二个标准蛋白质指纹图谱为大豆细菌性疫病的特征峰图，构成第二个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：2563.4、3330.8、3588.2、3620.5、3922.9、4129.2、4435.2、4857.2、4941.2、5126.1、5666.9、5976.1、6003.6、6344.1、6653.9、6879.0、7173.2、7238.5、7265.6、7876.7、8255.9、8829.3、9670.3、9877.9、9882.4、10203.5、11332.7；第三个标准蛋白质指纹图谱为大豆细菌性褐斑病的特征峰图，构成第三个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：2533.8、3551.2、3588.9、3620.3、3728.7、4129.0、4435.2、4835.2、4942.9、5125.1、5975.3、6006.1、6639.1、6879.1、7173.2、7237.9、7560.2、7670.9、8255.7、9671.8、9797.0、9880.9、10203.0、10235.2、11343.3；第四个标准蛋白质指纹图谱为豌豆细菌性疫病菌的特征峰图，构成第四个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：2562.7、3329.5、3620.9、3475.2、3588.4、3620.9、4128.2、4435.1、4940.8、5124.5、5973.7、6001.8、6354.7、6652.2、6877.6、7171.7、7237.5、7611.6、8252.1、9135.5、9502.3、9668.5、9877.4、10200.7、11338.8；第五个标准蛋白质指纹图谱为菜豆细菌性疫病的特征峰图，构成第五个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：4572.3、4630.1、5854.5、5885.4、6099.7、7558.2、8114.2、8269.3、8269.3、8407.2、8735.9、9162.9、9322.3、9595.6、9783.6、9820.4、10586.6、11940.2、12408.5、13561.4；第六个标准蛋白质指纹图谱为大豆斑疹病菌的特征峰图，构成第六个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：2485.4、2641.2、2728.4、2914.1、3061.4、3620.9、3714.4、4244.3、4971.0、5003.8、5374.8、6003.8、6103.0、7079.0、7385.0、8011.3、8484.7、8870.3、9095.4、9662.7、14755.0；第七个标准蛋白质指纹图谱为菜豆细菌性萎蔫病菌的特征峰图，构成第七个标准蛋白质指纹图谱的蛋白质的质荷比分别为：2583.6、3264.2、3426.5、3535.8、3739.9、3954.0、4146.5、4269.6、4470.4、4584.5、4624.4、4771.7、5166.3、5305.1、5683.4、5724.6、5898.4、6525.1、6673.0、7069.0、7280.8、7476.8、8119.3、8286.6、8527.4、9163.5、9244.9、9539.1、10246.8、10605.0、11362.4、11793.7、13342.3。