骨髓间充质干细胞表达成骨基因的构建方法

摘要

本发明适用于生物医药领域，提供了一种骨髓间充质干细胞表达成骨基因的构建方法。该方法利用携带低氧诱导因子1α的慢病毒感染骨髓充质干细胞、表达成骨基因，具体包括下述步骤：构建慢病毒表达载体Lenti-HIF-1α-eGFP；携带低氧诱导因子1α的慢病毒载体Lenti-HIF-1α-eGFP的包装；慢病毒载体Lenti-HIF-1α-eGFP感染骨髓间充质干细胞，获得能够表达成骨基因的感染骨髓间充质干细胞。

主权项

一种骨髓间充质干细胞表达成骨基因的构建方法，其特征在于，所述方法利用携带低氧诱导因子1α的慢病毒感染骨髓充质干细胞、表达成骨基因，具体包括下述步骤：构建慢病毒表达载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP：从Hela细胞中提取总RNA，反转录成cDNA，分别设计含酶切位点BamHⅠ的引物HIF‑1α‑F和含酶切位点和PspXⅠ的引物HIF‑1α‑R，利用上述引物对cDNA进行PCR扩增获得扩增基因片段—低氧诱导因子1α基因；将慢病毒包装质粒载体Lenti‑eGFP与所述扩增基因片段分别进行酶切处理，将酶切处理产物连接后转化处理，将转化产物扩增后进行质粒抽提，得到慢病毒表达载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP；携带低氧诱导因子1α的慢病毒载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP的包装：将慢病毒表达载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP与病毒包装质粒Lenti Pac HIV共转染至293Ta细胞中，进行病毒包装，获得携带低氧诱导因子1α的慢病毒载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP，收集病毒原液，并对病毒滴度进行监控；慢病毒载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP感染骨髓间充质干细胞：获取骨髓间充质干细胞，当骨髓间充质干细胞融合度达70％时，当病毒滴度以MOI为50时加入慢病毒载体Lenti‑HIF‑1α‑eGFP进行慢病毒感染，获得能够表达成骨基因的感染骨髓间充质干细胞。