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一种高品质低分子帕那肝素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：a)酶解：向粗品肝素钠中加入10～12倍量的水溶解，调节料液pH至8.0～8.5，控制料液温度为35℃～40℃，加入适量木瓜蛋白酶及核糖核酸酶II，酶解反应8～10小时，离心去沉淀，上清液过滤，收集滤液；b)氧化脱色：控制步骤a)中滤液温度为30℃～40℃，调整滤液pH为9～11，加入滤液体积0.3％～0.5％的过氧化氢，控温控pH下搅拌反应4～6小时，得纯化液；调节纯化液pH为6～8，加入适量氯化钠，微孔过滤，醇沉，分离得沉淀物；所述氯化钠与纯化液的质量体积比为0.8％～1％；c)超滤除杂：向步骤b)中所获得的沉淀物中加入20～25倍量的纯化水溶解，完全溶解后以截留分子量为3000～10000Da的超滤膜进行5～8小时切向流循环超滤，收集截留液；d)醇沉除杂：截留液醇沉除杂，所得沉淀物干燥称重；e)降解：以纯化水溶解步骤d)中所得的沉淀物得到浓度为3％～5％的肝素钠溶液，向溶液中加入适量氯化钠和乙酸钠，调节pH至7.5～8.5，再加入适量乙酸铜水溶液及料液体积2.5％～3.5％的过氧化氢，在50～55℃下进行降解反应；所述氯化钠的用量为步骤d)所得沉淀物重量的0.5％～1％；所述乙酸钠的用量为步骤d)所得沉淀物重量的1.5％～2％；所述乙酸铜的用量为步骤d)所得沉淀物重量的2.6％～2.8％；乙酸铜水溶液的浓度为4％；f)去除重金属：利用重金属吸附剂或超滤技术去除料液中的重金属；g)超滤：去除重金属后调节料液pH至6.8～7.2，用截留分子量为1000Da～3000Da的超滤膜循环超滤控制分子量，直到分子量达到控制标准，收集截留液；截留液醇沉，分离得沉淀物；h)氧化脱色：向步骤g)所得沉淀物中加入8～10倍量的水搅拌使其溶解，调节料液pH为9～10，加入料液体积1.2％～1.5％的过氧化氢，20～30℃料液温度下搅拌反应6～8小时；氧化完毕后，调节料液pH为6～8，向其中加入适量氯化钠，微孔过滤，醇沉，分离得沉淀物；所述氯化钠与料液的质量体积比为1.0％～1.2％；i)冻干：向沉淀物中加入10～12倍量纯化水进行溶解，溶解完成经0.1μm的除菌膜过滤，收集滤液，并调节滤液pH值至6.4～7.4；将滤液进行冻干处理，得帕那肝素成品。 |
