一种水稻黑条矮缩病抗性的分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种水稻黑条矮缩病抗性的分子鉴定方法，该鉴定方法步骤如下：1）获取带毒灰飞虱和鉴定标尺；2）带毒灰飞虱定量传毒胚芽鞘；3）荧光定量PCR获得每个品种周期时间点的RQ值；4）绘制RBSDV增殖指数趋势线并进行抗性评价。本发明能够在水稻萌芽期在分子水平上准确地鉴定水稻品种对水稻黑条矮缩病的抗性水平和抗性等级，鉴定周期短且准确度高，具有较大的育种应用价值。

主权项

一种水稻黑条矮缩病抗性的分子鉴定方法，其特征在于：该鉴定方法包括以下步骤：1）获取带毒灰飞虱和鉴定标尺：大田采集灰飞虱高龄若虫并纯化筛选，传代保存，鉴定前采用RBSDV毒源饲毒1.5‑2.5龄期灰飞虱若虫，获得带毒灰飞虱；根据人工接毒鉴定中不同品种对水稻黑条矮缩病抗性表现设置高抗、中抗、感病三个鉴定标尺，选择三个相应水稻品种做为鉴定标尺；2）带毒灰飞虱定量传毒胚芽鞘：每个品种取15‑20粒种子，用0.6%次氯酸钠溶液浸泡15min进行灭菌，超纯水冲洗干净，然后放置于25℃条件下适宜浓度的IAA溶液中低氧浸种培养3天，诱导出胚芽鞘；将胚芽鞘用超纯水洗净，放入铺有吸水棉的试管中，每个试管一个种子，定量接种带毒灰飞虱，用透气纱布封闭试管后平置，传毒24h；传毒后胚芽鞘用超纯水冲洗，然后放置于25℃条件下浸润了适宜浓度的ABA溶液的吸水棉上暗培养；3）荧光定量PCR获得每个品种周期时间点的RQ值：按照周期时间点取材上一步骤的胚芽鞘的特定部位，取材2‑3重复，提取并纯化病毒RNA，荧光定量PCR扩增RBSDV病毒S7片段，扩增完毕，进入结果分析界面，以QsUBQ5为内参，与对照组相比，获得每个品种每个取样时间点重复的RBSDV病毒S7与内参基因的相对表达量（RQ值）；4）绘制RBSDV增殖指数趋势线并进行抗性评价：用多重复的RQ值统计每个待测品种和鉴定标尺饲毒后每个取样时间点的RQ值均值，然后以RQ值均值为纵坐标，周期取样时间点为横坐标，对数据进行统计分析，获得RBSDV增殖指数趋势线y=Ae^kx，然后根据RBSDV增殖指数趋势线公式评价待测水稻品种对水稻黑条矮缩病的抗性水平和抗性等级。