一种野牛草愈伤组织的诱导方法

摘要

本发明提供一种野牛草愈伤组织诱导方法，其以野牛草种子为外植体，消毒后置于无菌滤纸上进行萌发，挑选已萌发长出胚根的种子，转入愈伤组织诱导培养基，在25±1℃条件下黑暗培养20-25天；所述的愈伤组织诱导培养基为MS培养基+2，4-D3.0-3.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH值5.8-6.0的固体培养基。本发明既排除了在消毒过程中消毒不彻底的种子在愈伤组织诱导过程中造成的污染现象，也排除了无生命力种子对愈伤诱导的干扰，同时也降低了操作的难度，免去了对成熟胚进行垂直切割的步骤，在简单易操作的基础上同时提高了愈伤诱导率，使其达到了90%以上。

主权项

一种野牛草愈伤组织的诱导方法，其特征在于，其以野牛草种子为外植体，消毒后进行萌发，挑选已萌发长出胚根的种子，转入愈伤组织诱导培养基，在25±1℃条件下黑暗培养20‑25天；所述的愈伤组织诱导培养基为MS培养基+2，4‑D 3.0‑3.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH值5.8‑6.0的固体培养基；所述诱导方法具体包括如下步骤：1)种子的预处理：将种子从颖苞中取出；2)外植体的消毒：将步骤1)中得到的种子用自来水洗净后，置于无菌操作台中用70％的酒精和有效氯浓度为7％‑10％的次氯酸钠溶液进行消毒，再用无菌水清洗4‑5遍；3)种子的萌发：将步骤2)消毒过的种子置于铺有湿润无菌滤纸的培养皿中，置于25℃的光照培养箱中，暗培养1～2天，期间要保证无菌培养皿中有足够的无菌水以便种子萌发；4)成熟胚愈伤组织的诱导：从培养皿中挑选已萌发长出胚根的种子，转入愈伤组织诱导培养基中进行愈伤诱导，所述愈伤组织诱导培养基为MS培养基+2，4‑D 3.0‑3.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH值5.8‑6.0，培养条件为25±1℃条件下黑暗培养，按照常规方法进行高压灭菌。