一种微小反应体系水平上的核酸恒温扩增检测方法

摘要

本发明公开了一种微小反应体系水平上的核酸恒温扩增检测方法，具体步骤包括在200μl的PCR管中配制微小反应体系、恒温检测反应和结果判断，结果判断时在PCR管中加入2μl荧光显色剂，混匀，阳性质粒显现为绿色，阴性质粒显现为橙色，且阳性质粒显现S型扩增曲线，阴性质粒显现直线扩增曲线，阳性质粒、阴性质粒在该微小反应体系水平上均实现正常扩增。本发明利用微小反应体系为恒温核酸扩增技术提供一种降低原料用量和成本的新途径，能极大地节省恒温核酸扩增所用原料，降低所需成本，从而极大地推动恒温核酸扩增技术在基础理论研究领域的推广和商业化应用。

主权项

一种微小反应体系水平上的核酸恒温扩增检测方法，其特征在于，具体步骤如下：1）在200μl的PCR管中配制微小反应体系：引物液：0.36‑1.44μl，反应液：3.04‑12.16μl，DNA聚合酶：0.2‑0.8μl，SYTO‑9：0.2‑0.8μl，待检DNA：0.2‑4.8μl，用DNase/RNase‑Free蒸馏水补齐到5‑20μl；2）恒温检测反应：设置阳性对照反应时，用含有目的基因的大肠杆菌质粒DNA替代待检DNA，设置阴性对照反应时，用不含目的基因的反应混合液替代待检DNA；将配制好的PCR管混匀后离心，并于温度设置为60‑65℃的PCR仪上反应45‑90min，并在80℃下持续反应2min；3）结果判断：在上述PCR管中加入2μl荧光显色剂，混匀，阳性质粒显现为绿色，阴性质粒显现为橙色，且阳性质粒显现S型扩增曲线，阴性质粒显现直线扩增曲线，阳性质粒、阴性质粒在该微小反应体系水平上均实现正常扩增。