利用脂肪间充质干细胞构建组织工程胰岛的方法及获得的组织工程胰岛

摘要

本发明公开了一种利用脂肪间充质干细胞构建组织工程胰岛的方法及获得的组织工程胰岛，此方法采用来源广泛的脂肪间充质干细胞在胰岛脱细胞基质上培养，使脱细胞基质为脂肪间充质干细胞提供适合生长的三维空间，促进细胞黏附、增殖、分化，并形成一个具有三维结构、并能稳定分泌胰岛素的工程胰岛组织，实现了分泌胰岛素细胞的聚集，提高了细胞利用率，有望促进组织工程法修复胰岛损伤的效果。

主权项

一种利用脂肪间充质干细胞构建组织工程胰岛的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将脂肪间充质干细胞离心后获得的细胞以脂肪干细胞培养并传代至P3代备用；(2)无菌条件下取出鼠胰岛组织，以PBS冲洗至清洗液澄清后浸在PBS中反复冻融裂解组织中的细胞，每个冻融循环包括液氮15min、37℃水浴5min共进行5～7个循环；(3)将步骤(2)冻融裂解后的组织放入低渗裂解液中，4℃、100rpm震荡消化24h后，以5mlPBS冲洗组织5次后放入到2ml核酸消化液中37℃消化组织4h，得到胰岛脱细胞基质，再以PBS冲洗组织6次后放入‑80℃冰箱中备用；(4)将步骤(3)获得的脱细胞胰岛组织剪切成2‑3mm³的小块，以PBS清洗后放入低吸附6孔培养板中，并将步骤(1)获得的P3代脂肪间充质干细胞消化后按照0.5‑1.5×10⁶/ml的密度重悬于脂肪间充质干细胞培养基中,并将细胞悬液加入到放入脱细胞基质的细胞培养板中培养24‑48h，然后每3天进行半量更换胰岛细胞诱导培养基，诱导培养12天。