检测细胞外基质MMP13的BRET探针、基因、表达载体和构建方法

摘要

本发明提供了一种检测细胞外基质MMP13的BRET探针，包括BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白，以及连接BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白的MMP13特异性识别降解的多肽底物；BRET生物发光供体为具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列的海肾的荧光素酶(Rluc8)，BRET受体荧光蛋白为黄色荧光蛋白。本发明构建的探针，自身的供体和受体蛋白之间通过可被MMP13特异性识别降解多肽底物连接产生BRET，当多肽底物被MMP13特异性识别降解之后，BRET现象消失，只能检测到生物发光供体发出的发射光，而不能检测到荧光蛋白的发射光；并且Rluc8蛋白的C端融合了含有血小板源生长因子受体的跨膜区域，因此能锚定在细胞膜的表面，可以在不损伤细胞的情况下进行活细胞外基质金属蛋白酶的检测，同时还具有更高的灵敏度。

主权项

一种检测细胞外基质MMP13的BRET探针，包括BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白，其特征在于，所述BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白之间通过MMP13特异性识别降解的多肽底物连接；其中，所述BRET生物发光供体为具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列的Rluc8蛋白，所述BRET受体荧光蛋白为黄色荧光蛋白。