促进小鼠骨髓造血干细胞体外克隆形成及分化能力的方法

摘要

本发明为促进小鼠骨髓造血干细胞体外克隆形成及分化能力的方法，在HSC细胞体外克隆形成及诱导定向分化实验中，血清质量是影响HSC扩增及生长状态的重要因素，本研究将原代细胞培养专用血清用于小鼠HSC克隆形成及定向分化实验，并与国内外四种胎牛血清进行了对比。采用免疫磁珠分离骨髓Lin-细胞，并进行集落形成实验，培养至14天，本血清可见疏松型集落形成，其他血清无集落形成。流式分析骨髓Lin-细胞向T细胞分化结果显示，其他血清培养至7天时，细胞死亡及凋亡严重，流式分析无法观察到细胞从DN2向DN4转化过程，而本血清培养至13天和20天时，骨髓Lin-细胞由DN2/DN3阶段逐渐向DN3/DN4阶段转化，动态显示HSC由造血前体细胞逐渐向T淋巴细胞转化的过程，本研究结果与国外相关文献报道一致，表明本血清具有促进HSC扩增及定向分化的生物学效应。

主权项

原代细胞培养专用血清在诱导小鼠骨髓造血干细胞(HSC)定向分化为T细胞中的应用，其特征在于：所述原代细胞培养专用血清是通过以下方法制备得到的：将胎牛脐带血室温静置12h后分离收集血清，将每头份血清依次进行内毒素、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原、抗体检测，将检测结果均为阴性的血清混合，0.1μm微孔滤膜过滤除菌并分装，‑20℃保存即可。