发明名称 制备林蛙皮胶原蛋白的方法
摘要 本发明公开了制备林蛙皮胶原蛋白的方法,包括:获得林蛙皮粉;预处理;加入至醋酸溶液中,微波下辐照,搅拌,离心,获得沉淀和含有酸溶性胶原蛋白的溶液;将沉淀分散于含有胃蛋白酶的醋酸溶液中,离心获得上清液,上清液进行透析,离心以便获得沉淀,将沉淀溶于醋酸溶液中,以便获得含有酶溶性胶原蛋白的溶液;向含有酸溶性胶原蛋白的溶液和含有酶溶性胶原蛋白的溶液中添加NaCl,搅拌,静置,再加入NaCl和三羟甲基氨基甲烷,以便获得溶液;调节溶液pH值,以便获得沉淀,将沉淀溶解于醋酸溶液中,以便获得溶液,将溶液进行透析直至pH为中性,以便获得溶液;将溶液预冻后,干燥,以便获得林蛙皮胶原蛋白。利用该方法能够提高胶原蛋白提取率。
申请公布号 CN104774895A 申请公布日期 2015.07.15
申请号 CN201510155478.6 申请日期 2015.04.02
申请人 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心 发明人 南雪;裴雪涛;单紫筠;张迦南;姚海雷;岳文
分类号 C12P21/06(2006.01)I;C07K14/78(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I;C07K1/30(2006.01)I 主分类号 C12P21/06(2006.01)I
代理机构 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 代理人 李志东
主权项 一种制备林蛙皮胶原蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)获取新鲜剥离的林蛙皮,除去皮下组织及粘连物,清洗,室温干燥,粉碎,以便获得林蛙皮粉;(2)称取所述林蛙皮粉10g,进行脱色和脱脂处理,以便获得预处理的林蛙皮样品;(3)将所述预处理的林蛙皮样品加入至100~500mL 1.0mol/L的醋酸溶液中,以便获得含有林蛙皮样品的醋酸溶液,将所述含有林蛙皮样品的醋酸溶液置于200~800W功率的微波下,辐照1~10min后,将经过微波处理的含有林蛙皮样品的醋酸溶液持续搅拌24~48h,离心,以便获得第一沉淀和含有酸溶性胶原蛋白的溶液和;(4)将所述第一沉淀分散于100~500mL含有0.01重量%~2重量%胃蛋白酶的1.0mol/L的醋酸溶液中,以便获得第一溶液,将所述第一溶液进行离心以便获得第一上清液,将所述第一上清液进行透析后,以便获得第一透析液,将所述第一透析液进行离心以便获得第二沉淀,将所述第二沉淀溶于100~300mL 1.0mol/L的醋酸溶液中,以便获得含有酶溶性胶原蛋白的溶液;(5)向所述含有酸溶性胶原蛋白的溶液和所述含有酶溶性胶原蛋白的至少之一中添加NaCl,直至NaCl终浓度为0.7mol/L,以便获得第二溶液,搅拌6~12h后,静置12~24h后,再加入NaCl和三羟甲基氨基甲烷,直至NaCl终浓度为2.4~3mol/L,三羟甲基氨基甲烷终浓度为0.1mol/L,以便获得第三溶液;(6)将所述第三溶液的pH值调节至7.0~7.5,搅拌6~12h,静置12h,离心,以便获得第三沉淀,将所述第三沉淀溶解于50~300mL 1.0mol/L的醋酸溶液中,以便获得第四溶液,将所述第四溶液进行透析直至pH为中性,以便获得第五溶液;(7)将所述第五溶液经‑20℃过夜预冻后,真空冷冻干燥,以便获得林蛙皮胶原蛋白。
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