一种体外组装草鱼呼肠孤病毒制备方法

摘要

本发明是一种体外组装草鱼呼肠孤病毒制备方法，具体是一种草鱼呼肠孤病毒GCRV核心与杆状病毒表达系统表达外衣壳蛋白VP5和VP7的体外组装的方法，该方法包括增殖GCRV873、含有核酸的病毒核心的获取及离心纯化、外衣壳蛋白VP5和VP7的表达、体外组装和离心纯化步骤。该方法简单、操作方便，其制备的纯化的体外组装病毒粒子R-GCRV为研究VP5及VP7介导的病毒侵染宿主细胞的机制提供了有效工具。

主权项

一种体外组装草鱼呼肠孤病毒制备方法，其特征是一种草鱼呼肠孤病毒GCRV核心与杆状病毒表达系统表达外衣壳蛋白VP5和VP7的体外组装的方法，该方法包括以下步骤：(1)增殖GCRV873：采用草鱼肾细胞系即CIK细胞增殖GCRV873，GCRV873是草鱼呼肠孤病毒湖南邵阳株；(2)含有核酸的病毒核心的获取及离心纯化：采用胰蛋白酶处理纯化的病毒，以降解外衣壳蛋白VP5和VP7，获得含有核酸的病毒核心，并采用氯化铯CsCl密度梯度进行离心纯化；(3)外衣壳蛋白VP5和VP7的表达：采用重组杆状病毒vAcGCRV‑VP5/VP7感染昆虫细胞系即Sf9细胞进行外衣壳蛋白VP5和VP7大量表达；(4)破碎细胞：将收集的表达外衣壳蛋白VP5和VP7的Sf9细胞进行冻融处理，以破碎细胞；(5)体外组装：将纯化的GCRV核心与在Sf9细胞中表达的外衣壳蛋白VP5和VP7按照合适的化学计量比进行混合孵育，实现GCRV的体外组装；(6)离心纯化：采用CsCl密度梯度对体外组装后的病毒颗粒进行离心纯化，得到纯化的体外组装病毒粒子R‑GCRV，其为具有感染性的体外组装草鱼呼肠孤病毒颗粒。