用于检测铬离子的间接竞争酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法

摘要

本发明涉及一种用于检测铬离子的酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法。试剂盒内设有用三价铬离子包被抗原包被过的酶标板、抗三价铬离子的单克隆抗体、酶标二抗、底物显色液、终止液、三价铬离子标准溶液、洗液浓缩液、样品处理液。检测前进行样品处理，使样品中Cr³⁺形成Cr³⁺-EDTA，然后用试剂盒进行检测。本发明的铬离子酶联免疫试剂盒，能检测痕量的铬离子，检测Cr³⁺的灵敏度为2ng/mL，具有快速、简便、敏感、特异、经济等特性，检测步骤少，节省检测时间，降低操作误差；检测成本不到理化分析方法的1/20，时效性强，可进行现场检测，主要用于环境、土壤、水、食品中铬离子污染残留的大批量样品的筛检。

主权项

一种用于检测铬离子的间接竞争酶联免疫试剂盒，包括盒体，其特征是：盒体内设有用三价铬离子包被抗原包被过的酶标板、抗三价铬离子的单克隆抗体、酶标二抗、底物显色液、终止液、三价铬离子标准溶液、洗液浓缩液、样品处理液；所述的三价铬离子包被抗原是由以下方法制备的： （1）称取10 mg异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸鳌合剂ITCBE溶于 1mL二甲基亚砜DMSO形成金属鳌合剂溶液；称取18.1 mg CrCL₃•6H₂O溶于1 mL浓度为10 mmol/L、pH值为8.0的HEPES缓冲液中，形成Cr³⁺溶液；将金属鳌合剂溶液和Cr³⁺溶液混合，并用NaOH调节pH值至7.0，然后在室温下放在摇床上反应12 h，即形成Cr³⁺‑ITCBE鳌合物半抗原溶液；（2）称取20 mg 卵清蛋白OVA溶于1 mL浓度为0.1 mol/L、pH值为8.0的HEPES缓冲液中，形成载体蛋白溶液；（3）取1 mL Cr³⁺‑ITCBE鳌合物半抗原溶液加入到1 mL载体蛋白溶液中，并用NaOH调节pH值至9.0，室温摇床反应24 h，然后移入透析袋中透析5天，收集透析液，即形成包被抗原Cr³⁺‑ITCBE‑OVA，收集分装，－20℃冻存备用；所述酶标板按如下方法包被：包被抗原为Cr³⁺‑ITCBE‑OVA，包被浓度为2 μg/mL，包被溶液为0.05 moL/L pH 9.6的碳酸盐缓冲液，包被剂量为100 μL/孔，37 ℃温育2 h或室温8 h，用洗液浓缩液PBST洗涤3次，用5%的猪血清封闭，每孔250 µL，37 ℃温育1 h，再用PBST洗涤3次；所述洗液浓缩液PBST为0.01 mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液，其中含0.05%的Tween‑20。