具有抑菌活性的银杏叶类脂成分的制备方法

摘要

本专利公开具有抑菌活性的银杏叶类脂成分的制备方法，以银杏叶为原料，通过非极性溶剂提取，分子蒸馏分离，再经柱层析，重结晶，纯化得到8个化合物(依次为异植物醇、橙花叔醇、芳樟醇、β-谷甾醇乙酸酯、β-谷甾醇、豆甾醇、麦角甾醇、胡萝卜苷)和聚戊烯醇以及银杏叶类脂总不皂化物、类脂结晶物、类脂轻馏分和类脂重馏分。本专利制备的8个化合物和聚戊烯醇以及银杏叶类脂总不皂化物、类脂结晶物、类脂轻馏分和类脂重馏分对于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉菌具有抑制作用。

主权项

具有抑菌活性的银杏叶类脂成分的制备方法，其特征在于包括下几个步骤：第一步，银杏叶类脂软膏的制备：取干燥粉碎的直径5毫米以下银杏叶粉，加入溶剂丙酮或乙酸乙酯或无水乙醇，银杏叶粉与溶剂质量比为1∶5～50；30～75℃加热回流提取，时间2～8h，重复3次或以上提取；合并提取液，回收溶剂，得银杏叶脂溶性成分软膏；加1～15％的KOH甲醇或乙醇溶液，软膏与溶剂比1∶2～15，单位kg∶L，采用30～75℃热回流搅拌，搅拌速度为20～200r/min，时间0.5～5h，得到皂化液；加入溶剂丙酮或乙酸乙酯，皂化液与溶剂比1∶2～10，单位V/V，合并提取液，回收溶剂，从而得到银杏叶类脂总不皂化物，第二步，银杏叶类脂成分的分子蒸馏分离：取银杏叶类脂总不皂化物，放于0～‑40℃下冷冻结晶1～5h，取出后迅速抽滤，得到结晶物；滤过的油状物通过刮膜式分子蒸馏装置分离，刮膜转速100～300r/min，蒸馏温度120～250℃，在真空度大于等于1.0×10⁵高真空条件下，轻组分以气体状态径直飞向中间冷凝器并凝结成液体，进入轻馏分收集器，得到轻馏分；重组分沿筒体内壁进入重馏分收集器，得到重馏分，第三步，银杏叶类脂成分的色谱分离：将第二步中所得的结晶物与填料硅胶G按质量比1∶1充分混合磨细，上硅胶G柱，用洗脱剂三氯甲烷/甲醇体系洗脱，收集的馏分用薄层色谱碘蒸汽显色跟踪；100％三氯甲烷馏分，挥干溶剂后用溶剂异丙醇或无水乙醇或乙腈在5～‑20℃下，重结晶得到化合物4即β‑谷甾醇乙酸酯；馏分99％∶1％，V/V三氯甲烷/甲醇，挥干溶剂后上Sephadex LH‑20柱，用洗脱剂三氯甲烷/甲醇体系洗脱，挥干溶剂后用溶剂环己酮或丙酮在0～‑20℃下，重结晶得到化合物5即β‑谷甾醇，剩余物挥干溶剂后用溶剂正戊醇或正丁醇在5～‑10℃下，重结晶得到化合物6即豆甾醇，剩余物挥干溶剂后用溶剂乙醚或正己烷在0～‑20℃下，重结晶得到化合物7即麦角甾醇；90％∶10％，V/V三氯甲烷/甲醇馏分，挥干溶剂后用溶剂三氯甲烷或无水乙醇在0～‑20℃下，重结晶得到化合物8即胡萝卜苷；第二步中所得的轻馏分与硅胶G按质量比1∶1充分混合磨细，上粒径0.04～0.1mm硅胶G柱，用洗脱剂石油醚/乙酸乙酯体系洗脱，收集的馏分用薄层色谱碘蒸汽显色跟踪；95％∶5％，V/V石油醚/乙酸乙酯馏分，挥干溶剂后用GF₂₅₄荧光硅胶薄层制备板制备，Rf值在0.50～0.65处，得到化合物1即异植物醇；92％∶8％，V/V石油醚/乙酸乙酯馏分，挥干溶剂后上Sephadex LH‑20柱，得到化合物2即橙花叔醇；90％∶10％，V/V石油醚/乙酸乙酯馏分，挥干溶剂后用GF₂₅₄荧光硅胶薄层制备板制备，Rf值在0.40～0.55处，得到化合物3即芳樟醇；将第二步中所得的重馏分与硅胶G按质量比1∶1充分混合磨细，上硅胶G柱，用洗脱剂石油醚/乙酸乙酯体系洗脱，收集的馏分用薄层色谱碘蒸气显色跟踪，取99％～97％∶1～3％，V/V石油醚/乙酸乙酯馏分，挥干溶剂后加入质量比为1∶5～15溶剂丙酮或乙酸乙酯，室温搅拌溶解；然后将其与质量比1∶1～5混合的活性炭与硅藻土，按固液质量比为1∶10～100混合，在‑40℃～30℃搅拌4～20小时，1000～10000转/分钟离心后过滤，上清液回收溶剂后即为纯化后的聚戊烯醇类脂。