马尾松优良单株无菌外植体制备及初始芽诱导方法

摘要

本发明公开了一种马尾松优良单株无菌外植体制备及初始芽诱导方法，选用成年优株当年新抽嫩稍的萌芽条为接穗，以马尾松组培苗为砧木进行嫁接，萌芽条采用系列消毒剂配合消毒的方式进行消毒处理，将外植体接穗置于经优化的诱导培养基中进行初始芽诱导，获得无菌外植体及生长快、活力旺盛的马尾松初始芽。本发明解决了马尾松成年优株组织培养中外植体消毒困难、褐化、初始芽发生率低、芽苗活性差等的技术问题，提高了初始芽发生率和芽苗活性，可获得90%以上无菌的健壮外植体，具有较好的经济效益和社会效益。

主权项

一种马尾松优良单株无菌外植体制备及初始芽诱导方法，其特征在于：包括外植体准备、外植体消毒处理、初始芽诱导，获得无菌外植体及生长快、活力旺盛的马尾松初始芽，其操作步骤如下：（1）外植体准备：采用半年生的马尾松组培苗为砧木,选择成年优良的马尾松母树当年新抽嫩梢作为接穗，用常规方法进行嫁接，成活后剪掉嫁接苗主梢促芽生长，选取3.0‑5.0 cm长萌芽条为外植体；（2）外植体消毒处理：将外植体用无菌水冲洗干净后，置于体积浓度为0.1‑0.3 %的广谱杀菌剂中浸泡0.5‑1 h，取出外植体将其置于体积浓度为70 %酒精中浸泡1‑2 min，再移入体积浓度为5‑8 %的次氯酸钠溶液中浸泡10‑20 min，取出放于体积浓度为10‑25 %的双氧水和5‑10滴吐温的混合液中搅拌浸泡20‑30 min后，最后用无菌水洗3‑4次，每次冲洗3‑5 min；（3）初始芽诱导：将消毒处理后的外植体切成1.0 cm长后，接种于诱导培养基中；所述的诱导培养基为：改良MS培养基 + 噻苯隆（TDZ）0.5‑2.0 mg·L^‑1 + Meta‑Topolin（MT） 1.0‑3.0 mg·L^‑1 + KT 1.0‑3.0 mg·L^‑1 + 葡萄糖30000 mg·L^‑1 + 琼脂3500 mg·L^‑1 + 0.1‑0.3 %广谱杀菌剂；初始芽诱导培养周期为：2‑3个月，温度：20±1℃，光照培养时间为：16 h，光照强度为：≤500 lx，获得生长健壮、活力旺盛的马尾松初始芽。