含N-乙酰化结构肝素寡糖的制备方法

摘要

本发明涉及含N-乙酰化肝素糖库的制备纯化方法，是以肝素酶Ⅰ深度酶解低分子量肝素来富集含N-乙酰化结构寡糖，然后通过Bio-Gel P10凝胶色谱法制备了包括二糖至十四糖的系列肝素寡糖粗样品，再利用强阴离子高效液相色谱等方法对粗样品进一步分离，分别提纯到4种六糖和3种八糖片段。应用肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ复合酶解与强阴离子色谱法分析各纯化寡糖的二糖组分，并结合肝素酶Ⅰ底物特异性，初步推断4种六糖和3种八糖的序列结构；最终应用电喷离子阱-时间飞行质谱（ESI-IT-TOF-MS）鉴定结构。本发明解决了含N-乙酰化肝素寡糖难制备及结构测定问题，该问题的解决也将使肝素/硫酸类肝素特殊结构和功能之间关系的研究得以进一步开展。

主权项

一种含N‑乙酰化结构肝素寡糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）以低分子量肝素为原料，经肝素酶Ⅰ酶解富集含N‑乙酰化结构的寡糖；（2）然后通过Bio‑Gel P‑10凝胶色谱法分离得到系列肝素寡糖粗样品；（3）再利用强阴离子高效液相色谱方法对步骤（2）的粗样品进一步分离，分别提纯得到4种六糖和3种八糖片段；（4）最后利用肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ复合酶解与强阴离子色谱法分析各纯化寡糖的二糖组分，并结合肝素酶Ⅰ底物特异性，分析4种六糖和3种八糖的序列结构；最后利用质谱法测定寡糖的分子量。