酸性橙Ⅱ人工抗原合成及酸性橙Ⅱ-IgY抗体制备方法

摘要

本发明公开了一种酸性橙Ⅱ人工抗原合成的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）称取酸性橙Ⅱ，加入丙酮溶解，再加入丁二酸酐、无水吡啶，加热回流24h；（2）旋蒸除去丙酮，干燥后可见蒸馏烧瓶底部一层橙色，加DMF溶解，再加入NHS、DCC，室温下在磁力搅拌器上搅拌，获得反应液，离心，去沉淀，制成酸性橙Ⅱ活化中间产物；（3）称取BSA或OVA，溶于PBS中，在磁力搅拌器上边搅拌边将酸性橙Ⅱ活化中间产物逐滴加入到BSA-PBS或OVA-PBS溶液中，搅拌过夜；（4）次日将搅拌过夜的反应液置于透析袋中，在冰箱内以PBS中透析72h，每8h换透析液一次；（5）透析结束后，将透析袋内液体离心，去沉淀，即得酸性橙Ⅱ人工抗原。

主权项

基于酸性橙II人工合成抗原制备酸性橙II‑IgY抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1酸性橙II人工抗原合成，其中，免疫抗原采用酸性橙II和牛血清白蛋白合成，检测抗原采用酸性橙II和卵清白蛋白合成；步骤2制备含抗体的免疫蛋，其中，向禽类注射所述免疫抗原，收集所述禽类所生产的蛋，并做标记于4℃保存；步骤3提取IgY，其中，从所述收集的蛋分离卵黄和卵清后，提取获得所述卵黄抗体；步骤3.1将所述收集的蛋进行卵黄与卵清分离，收集卵黄，将卵黄使用PBS按照体积比1∶2进行稀释；步骤3.2向稀释液加入质量体积比为3.5％的PEG‑6000，充分搅拌，摇床上室温作用30分钟；步骤3.3将混合液离心，收集上清，过滤，滤液加入质量体积比为8.5％的PEG‑6000，充分搅拌，摇床上室温作用30分钟；步骤3.4将经过搅拌后的混合液离心，弃去上清液，沉淀使用10毫升的PBS悬浮，加入质量体积比为12％的PEG‑6000，充分搅拌，摇床上室温作用30分钟，再进行离心，获得沉淀物；步骤3.5将所述沉淀物使用1.2毫升PBS溶解后，使用透析带进行透析，使用PBS透析过夜，获得的IgY，并保存在‑20℃备用。