一种用于研究醋糟基质中微生物群落结构的总DNA提取方法

摘要

本发明涉及到一种用于研究醋糟基质中微生物群落结构的总DNA提取方法。本发明先在醋糟基质中加入含有0.5%的β-巯基乙醇和0.5%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的DNA提取缓冲液，并加入蛋白酶K，放置37℃摇床摇30min，使基质中的微生物充分溶解在DNA提取缓冲液中后，用质量分数为20%的十二烷基磺酸钠(SDS)溶液裂解醋糟基质中的微生物细胞，用氯仿:异戊醇(24:1)抽提去除蛋白，用质量分数为2%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)去除腐殖酸、酚类物质后，用预冷的异丙醇沉淀，最后得到高质量的可直接用于PCR扩增的DNA。

主权项

一种用于研究醋糟基质中微生物群落结构的总DNA提取方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）先在醋糟基质中加入DNA提取缓冲液，并加入蛋白酶K，振摇，使醋糟基质中的微生物充分悬浮在DNA提取缓冲液中，所述DNA提取缓冲液的配方为：10 mM pH 8.0 Tris‑Hcl，100 mM pH 8.0 Sodium EDTA，100 mM pH 8.0 Sodium phosphate，1.5 M Nacl，1% CTAB，0.5% β‑巯基乙醇和0.5% PVP；（2）将步骤(1)制得的悬浮液用十二烷基磺酸钠裂解醋糟基质中的微生物，离心后取上清；(3) 加入与步骤(2)取得的上清液等体积的氯仿‑异戊醇混合液抽提蛋白，其中氯仿:异戊醇体积比为24: 1，离心后取上清；(4) 加入与步骤(3)取得的上清液等体积的聚乙烯吡咯烷酮水溶液，去除腐殖酸和酚类物质，离心后取上清； (5) 将装有步骤(4)中取得的上清液的离心管上下轻微的摇动，直至离心管中可见絮状物质，将离心管置于‑20 ℃沉淀 20 min； (6) 用体积分数为75% 的乙醇沉淀DNA后，用去离子无菌水溶解DNA，并用RNA酶去除DNA中的RNA。