一种玉米抗病相关基因MR6及其在玉米抗病改良中的应用

摘要

本发明涉及一种玉米抗病基因MR6、由其编码的蛋白质、表达载体及其应用；所述玉米抗病基因MR6的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示；由其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；表达载体构建方法如下：将通用双元载体pTF102的多克隆位点切除，将其GUS基因上游的2×35S启动子换成玉米泛素基因启动子获得遗传转化载体；将玉米抗病基因MR6用限制性内切酶XbaI和KpnI消化后回收DNA片段；将DNA片段插入到遗传转化载体的限制性内切酶酶切位点。通过转化病害敏感玉米，可以获得超量表达玉米抗病基因MR6的转基因玉米，该转基因玉米具有较强抗真菌性病害的能力。

主权项

一种通过超量表达玉米抗病基因MR6培育抗大斑病玉米的方法，包括下述步骤：取常规种植玉米自交系，当其开花期处于雌穗抽丝前进行套袋隔离，并人工协助自交授粉；授粉后继续套袋隔离，从第一次授粉开始，分别在24小时和48小时再次授粉，取下整穗玉米放入75％酒精中消毒5min，无菌蒸馏水冲洗3遍后，无菌环境吹干，用无菌刀片剥离下完整幼胚，进一步用75％酒精和0.1％升汞消毒，无菌水洗净后吹干，用农杆菌介导的方法将玉米抗病基因MR6表达载体pTF102‑MR导入吹干的幼胚；转化的未成熟胚在20‑25℃黑暗共培养3天，所用培养基为MS培养基+100μmol/L AS，再在新鲜的上述培养基中继续暗培养7天后，转到含1.5mg/L Bialaphos除草剂的MS固体培养基中28℃筛选培养，15‑20天后用3.0mg/L的Bialaphos进行2次筛选，筛选出的幼胚长到三叶期时将苗移至大盆中，在培养室中炼苗三天后移入温室内，进行正常的管理，最后得到转基因玉米；所述的玉米抗病基因MR6的表达载体pTF102‑MR，通过下述方法构建：将通用双元载体pTF102的多克隆位点切除，再将其GUS基因上游的2×35S启动子换成玉米泛素基因启动子，获得遗传转化载体pTE102‑M，将玉米抗病基因MR6用限制性内切酶XbaI和KpnI消化后回收包含MR6完整阅读框的DNA片段；将该DNA片段连接到用相同酶酶切的pTF102‑M载体，得到玉米抗病基因MR6表达载体pTF102‑MR；所述玉米抗病基因MR6核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。