一种筛选异化铁还原细菌的方法

摘要

本发明公开了一种筛选异化铁还原细菌的方法，包括：(1)利用逐步提高液体培养基中Fe(Ⅲ)浓度的方式对沉积物污泥进行富集培养；(2)从富集菌群中分离纯化异化铁还原细菌，以及重金属耐受能力和耐盐能力的梯度驯化步骤。所述异化铁还原细菌的筛选方法简便易行且筛选周期短，筛选过程中无需厌氧操作系统等昂贵的分离设备，有效降低了筛选成本，获得的纯化菌株具有较强的Fe(Ⅲ)还原能力。另外，通过对纯化菌株的重金属耐受能力和耐盐能力的梯度驯化能够快速、简便地获得对Cr(Ⅵ)重金属以及不同盐浓度环境具有耐受能力的异化铁还原菌株，为重金属、盐域等环境下的生物修复提供种质资源。

主权项

一种筛选异化铁还原细菌的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)利用逐步提高液体培养基中Fe(Ⅲ)浓度的方式对沉积物污泥进行富集培养：将污泥样品加入含Fe(Ⅲ)的液体培养基中，充氮气厌氧培养，所述液体培养基中Fe(Ⅲ)的初始浓度为5～10mmol/L，培养过程中将Fe(Ⅲ)还原能力较强的菌群逐步转接至Fe(Ⅲ)浓度更高的液体培养基中，每次转接将Fe(Ⅲ)的浓度提高5～10mmol/L，直至提高到50mmol/L；(2)从富集菌群中分离纯化异化铁还原细菌：将经过步骤(1)富集培养后的泥浆悬液离心，取上清菌液稀释后划线接种于Fe(Ⅲ)浓度为10～50mmol/L的固体培养基上，待菌液完全被固体培养基吸收后再倾倒一层相同的固体培养基，待上层的固体培养基凝固后，再倾倒一层液体石蜡加以封盖；将此三层平板培养24～72h后挑取单菌落，接种于Fe(Ⅲ)浓度为10～50mmol/L的液体培养基中，充氮气厌氧培养24～72h后测定液体培养基中Fe(Ⅱ)浓度，选取积累Fe(Ⅱ)浓度最高的菌株，再次接种于所述三层平板中进行培养和分离，重复上述过程，直至获得纯化菌株；所述步骤(1)、(2)中培养基的酸碱度均保持在：pH6.0～9.0；对应的培养温度均为：20～40℃。