一种基于核酸适体修饰的纳米通道分离β-雌二醇和雌酮的方法

摘要

本发明公开了一种基于核酸适体修饰的纳米通道分离β-雌二醇和雌酮的方法，是以制备的阵列金纳米通道为载体，在金纳米通道内修饰β-雌二醇的核酸适体，得到对β-雌二醇具有特定选择性的金纳米通道膜。利用β-雌二醇与雌酮结构上的差异，二者在修饰了核酸适体的纳米通道中的迁移速率不同，适配体对β-雌二醇具有选择性，较容易通过修饰后的纳米通道，而雌酮不容易通过，实现了二者的分离。本发明可为分离分析其他核酸适配体亲和性不同的雌激素提供一个新的思路。

主权项

一种基于核酸适体修饰的纳米通道分离β‑雌二醇和雌酮的方法，其特征在于：其步骤如下：1)金纳米通道膜的制备：将PC膜浸入无水甲醇中，超声震荡5min，以洗去基膜上吸附的杂质并将膜活化；然后将清洗后的PC膜浸入0.025mol/L SnCl₂溶液45min，不断轻微摇动溶液使Sn²⁺均匀地吸附在基膜及膜孔表面，取出用水漂洗2次；在N₂气保护下将膜浸入0.029M Ag(NH₃)₂⁺溶液中15min，取出用水洗4次，在甲醇中浸泡5～10min，浸入浓度为5～10mmol/L、pH＝10的亚硫酸金钠沉积溶液中；在1～4℃温度下化学镀金，5～6小时后取出用水洗4次，再用25％HNO₃浸12h除去未反应的Ag，即得到Au纳米通道阵列；2)金纳米通道的修饰：采用化学沉积的方法在50nm多孔聚碳酸酯膜上沉积金3h，得到功能化金纳米通道阵列；将制备的功能化金纳米通道膜浸入在1～3μmol/L核酸适体的pH＝7.4、0.5mmol/L Tris‑HCl缓冲溶液中孵化24h，使纳米通道修饰上核酸适体；然后用同浓度的缓冲溶液清洗修饰膜除去未键合的核酸适体分子，即可得到核酸适体功能化的纳米通道膜；3)纳米通道膜的分离迁移：将制备的核酸适体功能化的纳米通道膜置于U形流通池中间，将U形流通池分隔为进样池和扩散池，池中均有磁力搅拌器以相同速度搅拌，膜的有效透过面积为1.96cm²，进样池和扩散池容积为5mL；将待分离溶液置于进样池中，扩散池放置不含待分离物质的空白溶液；步骤2)中，所述功能化金纳米通道阵列的孔径约为20nm。