纳米金/壳聚糖-石墨烯-亚甲蓝修饰的免疫传感器的制备方法

摘要

本发明涉及纳米金/壳聚糖-石墨烯-亚甲蓝修饰的免疫传感器的制备方法，属于生物传感器技术领域。本发明第一步为壳聚糖-石墨烯-亚甲蓝纳米复合材料的制备，利用壳聚糖-石墨烯-亚甲蓝复合物有很好的电化学氧化还原特性、好的生物相溶性以及高度化学稳定性，修饰电极可促进电子转移；第二步为电沉积纳米金和滴涂壳聚糖-石墨烯-亚甲蓝纳米复合膜共同修饰电极的免疫传感器制备。具大量氨基的纳米复合膜可通过戊二醛共价交联抗体。纳米金有较高比表面积、良好稳定性、导电性和生物相容性，进而增大传感器的响应电流，且沉积过程简单、省时、可控。本发明的免疫传感器，检测时间较短，灵敏度高，选择性、稳定性好，再生能力好，回收率符合要求。

主权项

纳米金/壳聚糖‑石墨烯‑亚甲蓝修饰的免疫传感器的制备方法，其特征在于：壳聚糖‑石墨烯‑亚甲蓝纳米复合物的制备，制备步骤为：将壳聚糖溶于1.0%的醋酸溶液中，配制成0.5%壳聚糖溶液，室温下磁力搅拌至壳聚糖完全溶解，然后用NaOH将混合液的pH值调到5.0，称取10mg石墨烯加入到10mL 0.5%壳聚糖溶液中，超声分散8h得到分散均匀的壳聚糖‑石墨烯纳米复合液，称取一定量的亚甲蓝粉末溶于乙醇溶液中，配制成1mg/mL 的亚甲蓝溶液，再将壳聚糖‑石墨烯纳米复合液与亚甲蓝溶液以不同的比例混合，超声至分散均匀、稳定，经实验验证，石墨烯与亚甲蓝比例为2：1时，电流响应最强，且修饰电极表面信号最稳定；将预处理好的玻碳电极浸入含有0.1M氯化钾5mL 0.3mM的氯金酸溶液中，在‑0.2V的 电压下应用恒电位法电沉积200s，电沉积结束后用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，氮气吹干；电极表面晾干后，取7μL壳聚糖‑石墨烯‑亚甲蓝纳米复合液滴涂在电极表面，常温下静置2h，然后用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗，氮气吹干；将上述经纳米材料修饰好的电极浸入5%的戊二醛溶液中，30min后取出，冲洗吹干；将电极沉浸在毒死蜱单克隆抗体溶液中，4℃条件下浸泡8‑12h，取出后用磷酸盐缓冲液冲洗表面，晾干待用；最后将上述制备好的电极浸于0.5%的牛血清蛋白溶液中，室温下静置2h，以封闭非特异性结合位点，取出置于室温下晾干，免疫传感器制作完成，保存在4℃条件下备用。